摘要
红豆杉（Taxus）又名紫杉，主要活性成分是紫杉烷类化合物，其中以紫杉醇和10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)等最为人们所熟知。紫杉醇对诸如子宫癌、卵巢癌等多种癌症具有良好的疗效，10-DABⅢ不仅具有抑制肿瘤的作用，同时也是半合成紫杉醇和多烯紫杉醇等抗癌药物的重要前体物质。红豆杉中的紫杉醇、10-DABⅢ含量很低，大部分红豆杉枝叶中的10-DABⅢ含量在1/1000左右，紫杉醇含量在4/10000左右，由于红豆杉中紫杉烷类化合物低含量及结构的相似性，红豆杉枝叶中这两个化合物含量的准确分析和成分分离也会遇到较大的挑战。由于红豆杉资源的稀缺性和紫杉烷类药物需求的增长，人们对于原有红豆杉经过驯化栽培获得了10-DABⅢ和紫杉醇的高含量品种，其中10-DABⅢ和紫杉醇的含量分别达到6/1000和7/10000以上。本文以采自云南保山市的云南红豆杉(Taxusyunnanensis)驯化品种为研究对象，针对快速分析其中紫杉烷类化合物的需求，采用MSPD-HPLC方法构建其中紫杉醇和10-DABⅢ含量的分析方法;对该栽培品种中的主要紫杉烷类化合物进行提取、分离与结构鉴定，以确认其生产价值，由于红豆杉资源的稀缺性和紫杉烷类药物需求的增长。取得的研究结果如下: (1)研究建立了基质固相分散萃取-高效液相色谱法(MSPD-HPLC)分析红豆杉中10-DABⅢ和紫杉醇的方法。考察了包括样品预处理吸附剂及各种吸附剂质量、洗脱剂种类、洗脱剂浓度、洗脱剂体积对两种成分分析的影响。优化了选定的分散剂萃取红豆杉中的10-DABⅢ和紫杉醇的萃取条件。采用反相C18色谱柱以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱分离，在波长227nm下检测。结果表明:考察的12种固相分散剂中，碱性氧化铝具有良好的目标化合物萃取率，且当碱性氧化铝与样品的质量比为3∶1,6mL甲醇为洗脱剂洗脱时，10-DABⅢ和紫杉醇的回收率较高。建立的红豆杉枝叶中10-DABⅢ和紫杉醇的分析方法具有良好的线性关系(r≥0.9999),10-DABⅢ和紫杉醇的检出限与定量限分别介于0.0239～0.0301μg/mL和0.142～0.178μg/mL之间;3个水平标准物质浓度加入测定样品回收率的结果显示，各目标分析物平均加样回收率在93.6％～109.0％之间。MSPD-HPLC法与超声提取、热回流提取预处理分析结果的比较证明，3种方法对2种紫杉烷类化合物的萃取物检出量基本无差别，但MSPD法溶剂消耗少、操作简单，缩短了分析时间，提高了净化效率，可应用于红豆杉原料的快速分析。 (2)采用超声波辅助提取、活性炭脱色、液液萃取、硅胶色谱柱层析、重结晶等方法，从红豆杉中分离得到4个主要的紫杉烷类化合物，结合紫外光谱及TLC、HPLC归一化法分析，纯度均达到95％以上。采用核磁共振波谱鉴定其结构，分别是:化合物1为10-DABⅢ(10-decetyl-bacaatinⅢ)母核结构为6/8/6构型，化合物2为紫杉醇(Taxol),母核结构为6/8/6构型，纯度为99.1％,化合物3为TaxuspineB,母核结构为6/10/6构型，化合物4-三尖杉宁碱(Cephalomannine),母核结构为6/8/6构型，研究确认了该驯化栽培的红豆杉具有生产利用价值，为红豆杉紫杉烷类化合物的分离纯化提供参考和借鉴。 本文以云南采自云南保山市的云南红豆杉(Taxusyunnanensis)驯化品种为研究对象，针对快速分析其中紫杉烷类化合物的需求，采用MSPD-HPLC方法构建其中紫杉醇和10-DABⅢ含量的分析方法对影响10-DABⅢ及紫杉醇萃取物检出量的各因素进行了考察和优化，并与传统的超声提取法和热回流提取法进行比较确定方法的适用性;对该栽培品种中的紫杉烷类化合物进行提取、分离与结构鉴定，以确认其生产价值，为红豆杉的分离制备和结果解析提供更多的理论依据和参考。
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