摘要
mHERC6属于一种E3泛素连接酶，通过ISG化蛋白破坏病毒复制，然而，mHERC6在树突状细胞中的确切作用和作用机制尚未被确定，以及其介导的免疫性疾病中树突状细胞激活和免疫原性调控的功能和分子机制仍不清楚。在本研究中，我们发现mHERC6在树突状细胞抑制炎症免疫反应中起着关键的作用，此外，mHERC6也抑制了体内抗病毒效应。进一步的研究发现，mHERC6通过调节ERK信号通路抑制树突状细胞炎性细胞因子的产生。最后，我们发现mHERC6通过蛋白酶体途径降解B-Raf、C-Raf,从而激活ERK信号通路。总而言之，该研究结果揭示了mHERC6以B-Raf、C-Raf为靶点在调控树突状细胞功能中发挥重要作用，提示mHERC6可能在调控树突状细胞功能方面中作为潜在靶标。 研究方法 1.Herc6fl/fl和Herc6fl/fl;CD11c-Cre小鼠感染单纯疱疹病毒(herpessimplexviruses,HSV)后，于第七天取脾、肺研磨成匀浆，并从脾脏单细胞中分选出树突状细胞，均取一半细胞进行实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR,qRT-PCR)检测其mRNA,另一半细胞进行流式分析。同时取眼球血，并与脾、肺匀浆上清一起进行酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测其炎性细胞因子的分泌; 2.脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激Herc6fl/fl和Herc6fl/fl;CD11c-Cre小鼠骨髓源树突状细胞(murinebonemarrowderiveddendriticcell,mBMDCs),使用qRT-PCR技术检测炎性细胞因子的mRNA量，ELISA检测细胞因子的分泌，流式检测细胞共刺激分子的表达; 3.LPS刺激Herc6fl/fl;CD11c-Cre小鼠来源的mBMDCs及它们的对照组，与CD4+T细胞共培养，流式检测CD4+T细胞表面标志以及胞内细胞因子表达; 4.LPS刺激Herc6fl/fl;CD11c-Cre小鼠来源的mBMDCs及它们的对照组，蛋白免疫印迹(WesternBlot,WB)检测刺激后与其有关的信号通路因子; 5.通过药理学特异性抑制Herc6fl/fl;CD11c-Cre小鼠来源的mBMDCs及它们的对照组的相关蛋白，WB检测LPS刺激不同时间相关蛋白的表达，使用qRT-PCR技术检测炎性细胞因子的mRNA量; 6.LPS刺激C57BL/6野生型小鼠来源的mBMDCs,免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,COIP)检测mHERC6与B-Raf、C-Raf的相互结合; 7.将Flag-mHERC6和Myc-B-Raf或Myc-C-Raf一起转染到293T中，COIP检测mHERC6与B-Raf、C-Raf的相互结合; 8.将Flag-HERC5、V5-Ub和Myc-B-Raf或Myc-C-Raf一起转染到293T中，COIP检测HERC5对B-Raf、C-Raf泛素化的影响。 结果 1.mHERC6抑制树突状细胞中的免疫应答; 2.mHERC6抑制小鼠机体的免疫应答; 3.mHERC6在小鼠体内的抗病毒效应; 4.mHERC6激活树突状细胞内ERK信号通路; 5.mHERC6靶向B-Raf、C-Raf并通过蛋白酶体将其降解; 6.HERC5使B-Raf、C-Raf泛素化从而将其降解。 结论 mHERC6在树突状细胞中以B-Raf和C-Raf作为靶点，调控ERK信号通路,抑制IL-lβ、IL-6、IL-12、TNF-α炎性细胞因子的表达，同时抑制其抗原提呈功能及其对Thl、Th17细胞的分化的调控，进而抑制机体的抗病毒效应，但同时抑制小鼠体内病毒感染引发的“细胞因子风暴”，因而提高小鼠的存活率。
NETL