摘要
研究背景 神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)作为一种儿童实体肿瘤，目前发病机制仍不完全清楚，NB临床特征和预后具有很大的异质性，部分进展迅速，早期即可发生远处转移，并且存在远处转移的NB患者通常预后不良。骨髓转移是NB最多见的远处转移部位之一，常规骨髓细胞形态学检查灵敏度有限，骨髓流式细胞检测特异性不足且在结果判读方面存在主观性。实时定量聚合酶链反应(quantitativereal-timepolymerasechainreaction,qRT-PCR)技术的应用极大提高了肿瘤细胞检测的灵敏度和特异度，并且能以数字形式客观地反映检测结果。配对同源异型盒蛋白2B(paired-likehomeobox2b,PHOX2B)基因位于染色体4p13,能够调节自主神经系统神经元的发育，PHOX2B的突变失活则可阻碍交感肾上腺素能神经元的增殖和分化。起初的研究发现PHOX2B基因突变主要发生于家族性NB中，后续的研究证明，PHOX2B基因与多个NB发病相关的通路及转录因子存在关联，在免疫组化方面，PHOX2B蛋白被发现在NB肿瘤组织中表达，并且能够准确区分NB与其他肿瘤或组织。近些年，通过PCR检测发现，PHOX2BmRNA在部分NB患者骨髓中表达，一些研究利用PCR方法对治疗后的NB患者进行微小残留病灶(minimalresidualdisease,MRD)检测，发现PHOX2B具有较好的灵敏度。然而PHOX2B基因与NB的关系仍不完全明确，国内外目前对于初次诊断时NB患者骨髓PHOX2BmRNA的表达与临床特征及辅助检查结果间关系的研究甚少，国内对于初诊骨髓PHOX2BmRNA的表达对NB患者预后影响的研究亦少。 目的 分析初诊时骨髓PHOX2BmRNA表达与临床特征、初诊辅助检查结果间的关系，探究初诊骨髓PHOX2BmRNA表达分别对非高危患者及高危患者预后的影响，以探讨NB患者初诊骨髓中PHOX2BmRNA表达的临床意义。 方法 回顾性分析2020年10月-2022年12月郑州大学附属儿童医院血液肿瘤科收治的74例新诊断NB患者的临床资料，总结临床特征，74例NB患者均在初诊时采用qRT-PCR方法进行骨髓PHOX2BmRNA检测，使用PHOX2B与内参基因ABL拷贝数的比值衡量PHOX2BmRNA表达水平。采用卡方检验或校正卡方检验分析骨髓PHOX2BmRNA表达与临床特征的关系，多重比较采用Bonferroni方法校正显著性水平;采用Spearman秩相关检验分析初诊骨髓PHOX2BmRNA表达水平与临床特征的相关性;采用Kaplan-Meier法对74例NB患者进行生存分析，并分别探究了非高危组以及高危组患者初诊时骨髓PHOX2B表达和预后的关系，采用Log-rank检验对比不同生存曲线的差异。 结果 1.共纳入NB患者74例，男41例，女33例，男女比例1.24∶1,中位发病年龄31.1个月(0.1-144个月)。NB国际风险分级协作组(InternationalNeuroblastomaRiskGroup,INRG)临床分期:L1期8例、L2期24例、M期42例，危险度分层:极低危9例、低危11例、中危15例、高危39例。 2.74例NB患者中，初诊骨髓PHOX2BmRNA表达阳性者38例、表达阴性者36例。38例PHOX2B阳性患者的表达水平范围是0.0003％-116.607％,中位数为0.862％,其中2例为极低危/低危患者，表达水平分别为0.0013％、0.097％;8例为中危患者，表达水平范围是0.0007％-2.248％,中位数为0.407％;28例为高危患者，表达水平范围是0.0003％-116.607％,中位数为1.485％。 3.不同性别、不同发病年龄、不同肿瘤原发部位、初诊有无发热、腹痛/腹胀、触摸到包块、咳嗽、纳差、精神反应差、便秘、浅表淋巴结肿大、有无影像学危险因素(image-definedriskfactors,IDRFs)、不同肿瘤最大径、有无染色体11q23缺失的患者之间骨髓PHOX2B表达阳性率的差异均无统计学意义(P＞0.05);不同INRG分期、不同危险度分层、初诊时有无四肢疼痛/活动障碍、初诊血红蛋白值是否正常、不同初诊血清神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)水平、不同初诊血乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)水平、有无MYCW基因扩增、有无染色体1p36缺失、初诊骨髓细胞形态学是否阳性、初诊骨髓MFC是否阳性的患者之间骨髓PHOX2B表达阳性率的差异均存在统计学意义(P＜0.05)。 4.初诊骨髓PHOX2BmRNA表达水平与初诊血LDH、初诊血NSE、INRG临床分期、危险度分层均呈正相关(r＞0,P＜0.05),与初诊血红蛋白值呈负相关(r＜0,P＜0.05),与原发肿瘤最大径无相关性(P＞0.05)。 5.非高危组35例患者中2例失访，5例患者出现生存事件(疾病进展、复发、转移、或死亡)，其中骨髓PHOX2B阴性的25例患者中2例失访，1例患者出现生存事件，其余22例患者无事件存活;骨髓PHOX2B阳性的10例患者中，4例患者出现生存事件，其余6例患者无事件存活。采用Kaplan-Meier法进行生存分析，非高危组中，PHOX2B阴性组2年无事件生存(eventfreesurvival,EFS)率预估为87.5±11.7％,PHOX2B阳性组2年EFS率预估为57.1±16.4％,PHOX2B阳性组预估2年EFS率较阴性组明显偏低，经Log-rank检验后，两生存曲线间差异具有统计学意义(x2=4.819,P=0.028)。 6.高危组39例NB患者中2例失访，16例患者出现生存事件，其中骨髓PHOX2B阴性的11例患者中2例患者出现生存事件，其余9例患者无事件存活;骨髓PHOX2B阳性的28例患者中2例失访，14例患者出现生存事件，其余12例患者无事件存活。采用Kaplan-Meier法进行生存分析，高危组中，PHOX2B阴性组2年EFS率预估为50.0±25.0％;PHOX2B阳性组2年EFS率预估为24.5±13.1％,PHOX2B阳性组预估2年EFS率较阴性组明显偏低，经Log-rank检验后，两生存曲线间差异具有统计学意义(x2=4.497,P=0.034)。 结论 1.与常规骨髓细胞形态学及骨髓流式细胞术检测相比，基于qRT-PCR方法的骨髓PHOX2BmRNA检测具有更高的检出率。 2.初诊骨髓PHOX2BmRNA表达与INRG临床分期、危险度分层等临床特征有关，PHOX2BmRNA表达水平与初诊血红蛋白值、血LDH、血NSE存在相关性,可反映骨髓浸润程度和肿瘤负荷。 3.初诊骨髓PHOX2BmRNA阳性表达与NB患者的预后不良有关。
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