摘要
目的：通过构建脂多糖（LPS）所致的体内外急性肺损伤（ALI）模型，从内质网应激和氧化应激两个通路探讨锌离子转运蛋白-14（Slc39a14）在LPS所致的ALI中的作用；初步探索脂肪组织与肥胖相关基因（FTO）与Slc39a14的关系，从而为LPS所致的急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）提供可能的干预手段。 方法：利用LPS诱导构建ALI小鼠模型和体外细胞模型；肺组织H＆E染色、肺损伤评分、肺湿/干重比（W/Dratio）实验测定肺组织的病理损伤程度；siRNA转染试剂敲低细胞内Slc39a14表达量，检测细胞中内质网应激、氧化损伤及炎症相关指标；使用FTO转基因小鼠检测内质网应激、氧化损伤及炎症相关指标检测的变化。通过Westernblot测定内质网应激和氧化损伤相关指标（Bip、CHOP、HO-1、p62）；qPCR检测炎症相关指标（IL-Iβ、IL-6、TNF-α、CCL-2）。 结果：（1）LPS处理引起小鼠ALI：小鼠肺部暴露于LPS后，Hamp;E染色显示肺部中性粒细胞等炎症细胞浸润肺泡空间，肺泡壁增厚，肺泡结构部分消失；肺损伤评分逐渐升高；肺组织湿/干比明显上升。表明LPS造成了小鼠急性肺部损伤。（2）LPS处理引起小鼠肺部急性炎症：小鼠肺部暴露于LPS后炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL-2）含量明显上升。（3）LPS处理引起细胞炎症：细胞经LPS处理后，炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL-2）含量明显上升。（4）在LPS诱导的体内外ALI中，内质网应激和氧化应激被激活：Westernblot结果显示，LPS处理使肺组织和细胞中内质网应激、氧化应激通路相关蛋白（Bip、CHOP、HO-1、p62）表达增加，表明LPS激活了小鼠肺部和细胞中内质网应激、氧化应激通路。（5）LPS处理导致小鼠肺部和细胞中Slc39a14表达改变：小鼠肺部和细胞经LPS处理后通过Westernblot和qPCR检测，发现Slc39a14的蛋白水平和mRNA的水平均成上升趋势。（6）Slc39a14调控由LPS诱导的内质网应激和氧化应激：RAW264.7细胞中Slc39a14表达下调后，Westernblot检测细胞中内质网应激和氧化应激通路相关指标，结果显示Slc39a14下调可降低Bip、CHOP、HO-1、p62蛋白表达量。（7）LPS介导的内质网应激和氧化应激调控炎症：细胞中内质网应激和氧化应激通路相关指标（Bip、CHOP、HO-1、p62）下调后，通过qPCR检测炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL-2），发现炎症因子含量有所下降，说明LPS介导的内质网应激和氧化应激可以调控由LPS诱导的ALI炎症反应。（8）LPS处理可能引起细胞发生m6A修饰：LPS处理引起细胞中FTO表达下降，m6A水平上升。（9）FTO敲入和敲低转基因小鼠影响由LPS诱导的肺部损伤和炎症：FTO过表达可降低Bip、CHOP、HO-1、p62蛋白生成含量；通过qPCR检测炎症因子IL-1β，发现IL-1β含量有所下降。而敲低FTO可增加Bip、CHOP、HO-1、p62蛋白生成含量；通过qPCR检测炎症因子IL-1β，发现炎症因子IL-1β含量有所上升。 结论：FTO通过调控Slc39a14来影响内质网应激和氧化应激两条通路，进而调节LPS所致的ALI炎症反应，这种机制可能是由于FTO介导的m6A去甲基化修饰。
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