摘要
目的神解颗粒原方出自清代杨栗山编撰的《伤寒瘟疫条辨》——神解散。本研究进行神解散制备工艺研究，制定神解颗粒质量标准，进一步研究神解散饮片-浸膏粉-颗粒剂的量质传递规律，并探究其对于疫病的作用机制，进而预测神解散的功效关联物质，为进一步探究神解散药效物质基础及开发利用提供参考。 方法（1）阅读文献资料，对神解散原方记载、临床应用现状及组方药材的化学成分前沿进展进行梳理；通过正交试验研究神解颗粒的提取工艺：以神解散的出膏率、浸出物、绿原酸以及黄芩苷的含量为评价指标，确定处方加水量、煎煮时间及次数；以成型率、休止角、堆密度和吸湿率为评价指标，以熵权法分配权重，星点-响应面法优选神解颗粒的最佳成型工艺；（2）利用薄层鉴别法、高效液相法等探究神解颗粒质量属性，并建立其质量标准；（3）通过高效液相法建立神解散浸膏粉和颗粒剂的指纹图谱，并建立含量测定方法对神解散浸膏粉和颗粒中黄芩苷和表小檗碱等四种生物碱进行测定，计算神解散饮片-浸膏粉-颗粒剂黄芩苷和表小檗碱等四种生物碱的转移率，明确神解散饮片-浸膏粉-颗粒剂的量质传递规律；（4）运用TCMSP筛选神解散组方药材的化学成分，使用基因库搜索功能，获取疫病相关靶点信息，STRING数据库筛选出作用靶点构建PPI网络图，通过Cytoscape软件创建神解散活性成分与疫病的的关联网络图，借助DAVID数据库富集GO及KEGG通路信息；采用AutoDockVina软件将网络药理学获得的关键化合物和核心靶蛋白进行对接，利用Pymol将对接结果可视化，印证复方的潜在有效成分与靶点的结合程度；利用LPS诱导RAW264.7细胞，构建体外炎症模型，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中促炎因子——肿瘤坏死因子（TNF-α）等含量水平变化；结合指纹图谱、网络药理学、分子对接等预测神解散功效关联物质。 结果（1）神解颗粒制备工艺为：以料液比为1:10的加水量（首次浸泡1.5小时，补加2倍量水），煎煮3次，每次1小时。滤过，合并滤液，浓缩至稠膏，减压干燥至干浸膏，粉碎，按照药辅比1:1.5加可溶性淀粉，以80%乙醇为润湿剂，混匀，制成颗粒；（2）建立神解颗粒质量标准：神解颗粒的性状为浅棕色至棕色颗粒，味苦；建立了神解颗粒中黄芩、金银花、黄连、桔梗的专属性鉴别方法；颗粒剂检查项均符合要求；每袋含黄芩（酒）以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于101.0mg；（3）神解颗粒量质传递规律研究：建立10批神解散浸膏和颗粒的指纹图谱并标定了20个色谱峰，且指认出12个化学成分，包括盐酸小檗碱、绿原酸、黄芩苷、异绿原酸C、咖啡酸、槲皮素等。浸膏粉、颗粒剂指纹图谱的共有峰基本一致，相似度、相关性较好。黄芩苷、表小檗碱、盐酸黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱饮片-浸膏粉转移率、浸膏粉-颗粒剂转移率相对一致，传递稳定，神解颗粒的制备工艺及药材来源具有一定的稳定性及一致性；（4）通过构建中药-成分-靶点网络筛选神解散中的相关活性成分，发现槲皮素、山奈酚、木犀草素、黄芩素、汉黄芩素等成分可能为神解散发挥治疗作用的主要活性成分，人血白蛋白（Albumin，ALB）、白细胞介素-6（Interleukin6，IL6）、半胱氨酸蛋白酶3（caspase3，CASP3）、热休克蛋白90α（Heatshockprotein90α，HSP90AA1）等靶点是神解散治疗疫病的关键靶点，神解散具有抑制促炎因子释放的作用，其机制可能与调控TLR信号通路有关。基于指纹图谱、量质传递、网络药理学和分子对接研究，发现黄芩苷、表小檗碱、盐酸黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱等12个成分密切关联于神解散的功能属性，可预测其为影响神解散质量属性的潜在功效关联物质。 结论本研究建立了神解颗粒质量标准，研究了神解散饮片-浸膏粉-颗粒剂的量质传递规律，发现神解散对于疫病的作用机制与调整炎症因子表达和免疫调节有关，预测了神解散功效关联物质，为神解散的药效机制、质量控制以及进一步的开发利用提供参考。
NETL