基于网络药理学研究小檗碱联合吉非替尼对肺癌的影响

扫码查看

原文链接

NETL

中文摘要：目的：肺癌的发病率和死亡率居高不下，成为严重影响人类健康的主要原因之一。现目前对于肺癌的治疗主要采用放化疗为主，而吉非替尼是临床上治疗肺癌的特效化疗药物，作用于EGFR靶点，但临床方面的数据显示其具有副作用，并且患者会对其产生耐药性。中药黄连的提取物小檗碱具有很大的医学价值，主要治疗心血管疾病和消化系统疾病，但近年来，其对抗肺癌的价值逐渐被发掘。因此，本文选用非小细胞肺癌A549和H1299两种细胞为研究对象，探究小檗碱联合吉非替尼对非小细胞肺癌的影响，并研究其作用机制。方法：使用MTT法筛选出适用于两种细胞的小檗碱和吉非替尼的浓度；并用小檗碱和吉非替尼单独或联合处理两种细胞，再使用MTT法检测出细胞活性；用Hoechst染色法探究细胞凋亡情况；用MDC染色法探究细胞自噬情况；用流式细胞术检测细胞周期和凋亡比例；使用qPCR检测相关mRNA的表达量；使用网络药理学查找小檗碱、吉非替尼和非小细胞肺癌的共同基因，并对其进行PPI蛋白互作、GO和KEGG分析，筛选出可能作用的信号通路；使用分子对接检测小檗碱和受体蛋白结合能力；使用Westernblot检测信号通路上蛋白质的表达量。结果：当小檗碱和吉非替尼联合作用处理肺癌后，细胞活性降低；细胞核固缩，凋亡细胞增多；自噬小泡增多，自噬细胞增多；细胞周期阻滞在G0/G1期；两种细胞的凋亡率增加；Bax和LC3-Ⅱ的mRNA表达量显著升高，Bcl-2和CyclinD的mRNA表达量显著降低。同时，网络药理学探究发现，小檗碱、吉非替尼和非小细胞肺癌一共有5个共同基因：SRC、KDR、EGFR、MET、EPHB4。小檗碱和吉非替尼作用于非小细胞肺癌相关的信号通路主要有：EGFR信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路等；分子对接发现，小檗碱和EGFR靶点可以通过HIS-888可以良好地结合；小檗碱联合吉非替尼处理后，Westernblot检测发现EGFR、PI3K、AKT的表达量无显著性差异，其磷酸化蛋白p-EGFR、p-PI3K、p-AKT表达量显著下降。结论：小檗碱联合吉非替尼可能是通过EGFR/PI3K/AKT信号通路抑制非小细胞肺癌A549和H1299细胞增殖、促进细胞凋亡和自噬。该研究为小檗碱增强吉非替尼治疗非小细胞肺癌提供理论基础和实验依据，为小檗碱应用于临床辅助治疗肺癌奠定基础。

作者：

胡元欣

展开 >

关键词：

非小细胞肺癌网络药理学分子对接小檗碱吉非替尼

授予学位：

硕士

学科专业：

生物学

导师：

伍春莲

学位年度：

2023

学位授予单位：

西华师范大学

语种：

中文

中图分类号：

R73