摘要
目的：研究过表达的谷氨酸转运体-1（glutamatetransporter-1,GLT-1）对无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中神经元的保护作用及其机制，为进一步揭示GLT-1可能作为治疗癫痫的一个重要靶点提供理论依据。 方法：为探讨过表达的GLT-1对无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中神经元的保护作用，本实验选用新生24h以内的健康SD乳鼠大脑皮层，进行星形胶质细胞（astrocyte，Ast）和神经元原代培养，免疫荧光法鉴定培养细胞的纯度；纯化后的Ast行慢病毒转染过表达GLT-1；转染后的Ast与神经元共培养至第10天，换无镁细胞外液诱导建立共培养细胞癫痫模型。后续的实验分成正常对照组、无镁组、无镁+GLT-1过表达慢病毒组（LV-GLT-1）和无镁+空载体慢病毒组（Vector-GLT-1）。采用流式细胞仪技术检测神经元胞内钙离子的浓度（[Ca2+]i）、活性氧（ROS）水平和神经元的凋亡率变化；微板法检测共培养体系培养上清中Glu的含量。 为进一步探讨过表达的GLT-1对无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中神经元的保护机制，按照上述四个分组处理后，采用RT-qPCR和WesternBlot分别检测星形胶质细胞中GS、SN1、CX43和神经元中SNAT1的表达。 结果：1.星形胶质细胞和神经元的纯度均为95%以上。 2.在无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中，星形胶质细胞中GLT-1的表达较对照组显著下降；神经元[Ca2+]i、ROS水平、神经元的凋亡率和培养上清中Glu水平均较对照组显著升高，过表达GLT-1可明显逆转上述的变化。 3.在无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中，GS、SN1、SNAT1的mRNA和蛋白表达均较对照组显著降低，CX43的mRNA和蛋白表达均较对照组显著升高，过表达GLT-1可明显逆转上述的变化过程。 结论：1.星形胶质细胞GLT-1失调可能导致Glu介导的神经元损伤。 2.过表达GLT-1可通过促进谷氨酸和谷氨酰胺循环及影响半通道的开放，促进星形胶质细胞对摄取Glu的代谢，继而缓解无镁细胞外液诱导的神经元损伤作用。
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