摘要
目的： 本研究通过生物信息学数据、口腔癌病理组织切片和口腔鳞癌细胞进行实验，研究PLOD2在口腔癌中的表达及对口腔癌恶性生物学行为的影响。 方法： 生物信息学：R语言分析TCGA生物信息学数据，筛选头颈部鳞状细胞癌（HeadandNeckSquamousCellCarcinoma,HNSC）相关差异基因，进行LASSO分析COX回归预测靶基因，结合临床病理特征对目标基因进行分析。组织学：收集2016-2020年南京医科大学附属口腔医院病理科口腔癌患者的组织标本病理切片共49例，经免疫组织化学方法检测PLOD2在口腔癌组织中的表达，并结合临床病理资料分析其临床意义。细胞学：利用定量实时聚合酶链式反应（quantitativereal-timepolymerasechainreactionPCR,qRT-PCR）和蛋白免疫印迹实验（WesternBlot,WB）分别检测PLOD2mRNA和蛋白在口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-2、HN4及人口腔正常角质形成细胞（Humanoralkeratinocyte,HOK）中的表达。构建PLOD2慢病毒敲减质粒和空载对照质粒，分别命名为shRNA-PLOD2和shRNA-NC。在高表达PLOD2的口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-2、HN4中分别敲减PLOD2，应用荧光倒置显微镜观察转染效率，qRT-PCR技术和WB技术进一步明确敲低效果。通过体外实验观察PLOD2对口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-2、HN4的增殖、集落、迁移和侵袭的影响。本研究采用SPSS26.0进行数据分析，计量资料符合正态分布采用均数加减标准差表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析；计数资料用频数（构成比）[n(%)]表示，组间分类对比采用?2检验或Fisher精确概率法，P＜0.05代表差异具有统计学意义（*P＜0.05,**P＜0.01）。 结果： 生物信息学：分析生物信息学数据得出目标基因PLOD2，且在两个在线数据分析平台同时验证PLOD2在HNSC中高表达：GEPIA数据平台得出PLOD2的表达与肿瘤分期及总体生存期相关；TCGA数据平台得出PLOD2表达与HNSC分化程度相关。组织学：免疫组化结果显示PLOD2在口腔癌中的阳性表达率为76.2%，明显高于非癌组织14.3%，差异具有统计学意义（P＜0.05），但PLOD2的表达与临床病理特征无显著相关性。细胞学：细胞实验结果表明，PLOD2在口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-2、HN4中的表达水平明显高于在口腔正常角质形成细胞HOK中的表达。口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-2、HN4成功稳转慢病毒敲减PLOD2质粒（shRNA-PLOD2），且与敲减对照组（shRNA-NC）相比，shRNA-PLOD2组显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-2、HN4在体外的迁移和侵袭。 结论： PLOD2在预测口腔癌预后方面具有潜在价值，该基因敲低可显著抑制口腔癌的迁移和侵袭。
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