摘要
目的:基于生物信息学方法，分析p53和DNA损伤调节基因1(p53andDNAdamageregulatedgene1,PDRG1)在结直肠癌(colorectalcancer,CRC)中的表达及临床意义。通过建立PDRG1过表达细胞系，研究PDRG1对结肠癌细胞生长、增殖的影响，初步探讨可能作用的靶基因及调控的信号通路，为结直肠癌的治疗提供新的方向。 方法:检索TCGA数据库中结直肠癌数据集，比较PDRG1在CRC癌组织和正常组织中的差异，分析其表达与临床病理参数及患者预后的关系。通过细胞慢病毒转染建立PDRG1过表达SW480和DLD1细胞系，Westernblot检测构建效果。CCK-8法和细胞克隆形成实验检测PDRG1高表达对细胞生长和增殖的影响。Westernblot检测p53和p21蛋白的表达。应用p53激动剂Nutlin-3上调p53和p21蛋白表达，CCK-8及细胞克隆形成实验检测Nutlin-3对结肠癌细胞生长、增殖的影响。通过生物信息学分析、蛋白组学、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫共沉淀(Co-IP)等方法探索并验证PDRG1发挥促癌作用的互作分子。 结果:TCGA数据库分析发现，PDRG1mRNA在CRC癌组织中的表达较正常组织显著增高，且癌组织中的高表达与肿瘤位置、肿瘤复发及远处转移有关。Kaplan-Meier生存分析结果证实，PDRG1mRNA高表达组结直肠癌患者的无瘤生存期显著缩短，差异有统计学意义(P=0.0193)。细胞实验结果显示:与对照组相比，PDRG1过表达组细胞生长加快，细胞集落数增加(P＜0.001);p53和p21的蛋白表达显著降低(P＜0.05)。蛋白组学测序结果表明PDRG1表达与p53信号通路有关。应用激动剂Nutlin-3组p53和p21的表达明显上调，细胞的生长及增殖活力降低(P＜0.05)。生物信息学分析显示eIF6与PDRG1的表达呈显著正相关(r=0.82,P＜0.0001),且eIF6在多种肿瘤中普遍高表达，在结直肠癌中的表达明显高于正常组织(P＜0.05)。qRT-PCR检测30例配对结直肠癌及癌旁组织，结果显示癌组织中eIF6mRNA的表达水平显著高于癌旁组织，差异有统计学意义(P＜0.05)。Co-IP结果证实PDRG1与eIF6存在相互作用。 结论:PDRG1在结直肠癌中表达增加，且与肿瘤位置、肿瘤复发、远处转移和无瘤生存期密切相关。PDRG1高表达显著促进结肠癌细胞生长、增殖，可能通过抑制p53和p21表达发挥促癌作用。应用Nutlin-3增加p53和p21的表达，减弱PDRG1对结肠癌细胞生长和增殖的促进作用。PDRG1可能通过与癌基因eIF6相互作用发挥促癌作用,为结直肠癌的研究提供了新的方向。
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