摘要
目的： 肥胖以及一些胃肠障碍疾病是威胁人类健康的重要因素，因此成为目前医学界的研究热点。钙离子敏感受体（Calcium-sensing receptor，CaSR）是一种典型的感受营养物质的 G 蛋白偶联受体，除了能够被钙离子（Ca2+）激活外，还可被多肽、氨基酸激活，参与摄食以及胃肠运动的调节。在中枢中，CaSR 在极后区（area postrema，AP）中有丰富的表达，而AP与摄食、胃排空和肠道运动之间有着密切的联系，在本文中，我们探讨了AP中CaSR对摄食以及胃肠道运动的影响及潜在机制。 方法： 1. 采用雄性C57BL/6小鼠，观察在AP中微量注射CaSR激动剂-R568对小鼠摄食量、小鼠胃排空率以及肠道传输时间的影响。 2. 酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测AP中谷氨酸、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）、室旁核（the paraventricular nucleus，PVN）中催产素（oxytocin ，OT），迷走神经背核（DMV）中Ach以及胃肠组织中神经递质的含量。 3. 免疫荧光染色法观察PVN中OT和c-fos，AP中GABA、VGluT1阳性神经元和CaSR、PVN中GABA-A受体\离子型谷氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor， NMDAR）和OT、迷走运动背核（dorsal nucleus of vagus nerve，DMV）ChAT与c-fos以及ChAT和NMDAR的共染情况。 4. 电损毁PVN，观察对R568抑制摄食作用的影响。 5. 化学遗传实验抑制 GABA和谷氨酸神经元，观察对 R568引起的摄食行为及胃肠道运动变化的影响。 6. AP注射 GABA-A受体阻断剂和谷氨酸受体阻断剂（离子型/代谢型），观察其对R568引起的摄食量和胃肠道运动变化的影响。 7. 顺行追踪技术联合免疫荧光染色法，在 AP注射携带 CaMKlla启动子的顺行病毒，在荧光显微镜下观察AP向DMV ChAT神经元的纤维投射。 结果： 第一部分 AP CaSR对摄食的影响及机制探讨 1. 结果显示，AP中微量注射R568后，与DMSO组相比，R568组的摄食量在0-2h明显减少（P＜0.05）; 2. ELISA结果显示，与DMSO组相比，R568组AP的谷氨酸和GABA的含量明显增加（P＜0.05），PVN中OT的含量也明显增加（P＜0.05）； 3. 在AP中微量注射R568后, 采用免疫荧光染色法观察到OT、c-fos阳性神经元以及OT与c-fos阳性神经元共染的数量增多（P＜0.05）； 4. 电损毁PVN后，R568的厌食作用被抑制（P＜0.05）； 5. 免疫荧光结果显示，AP 中 CaSR 和 VGluT1 神经元之间有共染；而 CaSR 和GABA神经元之间并不存在共染； 6. 化学遗传结果显示，抑制谷氨酸神经元之后，R568 的厌食作用被抑制（P＜0.05）； 7. PVN内预先微量注射GABA-A受体阻断剂和离子型谷氨酸受体阻断剂，R568的厌食作用减弱（P＜0.05）； 8. 免疫荧光结果显示，PVN中GABA-A受体以及NMDAR和OT有共染。 第二部分 AP CaSR对胃肠动力的影响及机制探讨 9. AP 中微量注射 R568 后，胃排空率显著降低（P＜0.05），肠道传输时间也明显延长（P＜0.05）； 10. ELISA结果显示，AP中注射R568后，DMV中Ach的含量明显增多（P＜0.05）； 11. 免疫荧光染色结果显示，AP中微量注射R568后, 在荧光显微镜下观察到ChAT、c-fos阳性神经元以及ChAT与c-fos共染神经元的数量明显增多（P＜0.05）； 12. 免疫荧光结果显示，DMV中注射FG一周之后，AP中FG、VGluT1和CaSR之间有共染，同时顺行追踪结果显示，AP 中注射携带 CaMKlla 启动子的病毒， DMV中谷氨酸纤维和ChAT阳性神经元有共染。 13. 化学遗传结果显示，抑制 AP 中谷氨酸神经元，R568 抑制胃肠运动的作用被减弱（P＜0.05）。 14. 在 DMV 中提前微量注射离子型谷氨酸受体阻断剂，R568 对胃肠运动的抑制作用被减弱（P＜0.05）；免疫荧光结果显示在DMV中，NMDAR和ChAT有共染。 15. AP中微量注射R568后，ELISA结果显示在胃中，Ach含量明显减少（P＜0.05）, nNOS 含量显著增加（P＜0.05）。在近端小肠中，Ach 含量明显升高（P＜0.05）；在远端小肠中，nNOS 表达量显著降低（P＜0.05）；在结肠中多巴胺（DA）含量显著增加 （P＜0.05）。 结论： 1.AP中CaSR激活可抑制摄食；AP的谷氨酸能神经元介导了 R568的厌食作用；下丘脑PVN中的GABA-A受体和离子谷氨酸受体（NMDAR）参与了 R568的作用。R568对PVN中OT的合成也有促进作用，该作用是由PVN中的NMDAR介导的。 2.AP中微量注射R568抑制胃排空以及延长肠道传输时间；该作用和谷氨酸能神经元激活，兴奋DMV的ChAT神经元并增加Ach的合成有关，该作用由NMDAR介导。ChAT神经元进一步通过迷走神经传出改变胃肠道中神经递质的合成，抑制胃肠运动。
NETL