摘要
背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化道恶性肿瘤之一，其全球发病率在男性肿瘤中排行第3,女性肿瘤中排行第2;死亡率在男女分别为第4位和第3位。小白菊内酯(Parthenolide,PTL)是清热解毒药小白菊的有效提取成分，可诱导肿瘤细胞的死亡，抑制肿瘤生长。本研究希望阐明小白菊内酯诱导结直肠癌细胞程序性坏死，并增加CD8+T细胞在肿瘤的浸润，同时改善T细胞耗竭，从而抑制结直肠癌的发展的机制，并通过构建其靶向脂质体改进其临床应用。 方法:分别通过在C57BL/6J小鼠腹股沟皮下注射MC38细胞构建皮下瘤模型与在小鼠回盲部移植肿瘤构建结直肠癌原位移植瘤模型，观察不同浓度与不同形式小白菊内酯对结直肠癌肿瘤生长的影响。利用流式细胞术分析小白菊内酯改善肿瘤浸润CD8+T细胞耗竭表型的变化。CCK8实验检测细胞经小白菊内酯处理后的增殖能力。ROS与LDH检测分析小白菊内酯诱导的细胞死亡方式。通过免疫组化，蛋白免疫印迹检测目的蛋白表达。利用低速散成方式构建小白菊内酯脂质体并对其进行表征。所有统计通过Graph Pad prism8.0完成。 结果:1、小白菊内酯诱导MC38细胞程序性坏死。MC38细胞在PTL作用下随着药物浓度梯度增加细胞活力逐渐下降，ROS水平与上清LDH水平逐渐上升，这一效应可被抑制剂Nec-1拮抗，同时免疫蛋白印迹分析显示经PTL处理细胞出现RIP3和MLKL的磷酸化。2、小白菊内酯改善肿瘤浸润CD8+T细胞耗竭。在小鼠皮下瘤模型中，经流式细胞术分析，与模型对照组或低剂量组相比,使用高剂量PTL处理的分组中出现了肿瘤CD3+CD8+T细胞的浸润增加，同时PD1hiTIM3+T细胞比例显著降低，而PD1loTIM3-T细胞比例显著升高。3、小白菊内酯靶向脂质体增加结直肠癌原位移植瘤CD8+T细胞浸润。使用低速散成法合成小白菊内酯脂质体，并通过酰胺化反应连接靶向多肽肽段TCP-1构建小白菊内酯靶向脂质体。在小鼠结直肠癌原位移植瘤模型中，经过PTL治疗，免疫组化结果显示CD8表达较模型组明显增加，而使用了高浓度靶向脂质体治疗的肿瘤中CD8表达更进一步增加。 结论:小白菊内酯通过诱导细胞程序性坏死、改善肿瘤浸润CD8+T细胞耗竭调控结直肠肿瘤的生长，其靶向脂质体能提高其抗肿瘤效应。
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