摘要
目的与意义:本研究以中医经典方剂黄连解毒汤为研究对象，以中医传统理论为指导，以药理学及分子生物学技术为研究手段，结合网络药理学、分子对接、代谢组学等研究方法，综合考察黄连解毒汤对LPS致大鼠发热模型的解热作用及潜在机制，为黄连解毒汤的解热功效研究及应用开发提供参考。 方法:①通过TCMSP,BATMAN-TCM和ETCM平台搜索黄连解毒汤的主要成分及蛋白靶点，运用Cytoscape3.8.2构建成分靶点网络。在GeneCard,DisGeNET和DrugBank平台获取疾病靶点，将成分与疾病重合靶点导入STRING数据库，构建PPI网络;对核心靶点进行GO和KEGG分析，再对核心靶点与成分开展分子对接。②采用LPS复制大鼠发热模型，监测大鼠肛温变化;ELISA法测定大鼠血清中TNF-α,IL-6,IL-1β以及下丘脑中PGE2和cAMP的表达;Western Blotting法检测网络药理学预测的MAPK信号通路相关蛋白的表达。③借助代谢组学技术，检测大鼠血清代谢物变化，筛选潜在差异代谢物，并富集相关信号通路，阐释黄连解毒汤解热作用的代谢特征。 结果:①网络药理学结果提示，TNF,JUN,AKT1，TP53,IL6和IL-1β等是黄连解毒汤解热抗炎作用的潜在关键蛋白;富集分析结果表明，黄连解毒汤发挥解热抗炎作用参与调节的通路涉及MAPK信号通路，TNF信号通路和Toll样受体信号通路等;分子对接结果显示，黄连解毒汤的主要成分与TNF,JUN,AKT1均能稳定结合。②药理效应考察表明，通过LPS造模后大鼠体温显著上升，黄连解毒汤可改善体温调节紊乱现象，调节TNF-α,IL-6,IL-1β以及PGE2和cAMP生化指标的表达水平。分子生物学研究结果显示，黄连解毒汤的不同剂量组均降低了大鼠下丘脑组织中ERK,JNK和p38磷酸化蛋白的表达水平。③代谢组学研究结果显示，在电喷雾离子源正负离子模式下，从大鼠血清中初步鉴定出7种差异性内源性代谢物;信号通路富集分析表明，甘油磷脂代谢、花生四烯酸代谢、苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的生物合成和苯丙氨酸代谢等途径与黄连解毒汤的代谢调节作用高度相关。 结论:本实验研究结果表明，黄连解毒汤可显著改善由LPS诱导的大鼠发热症状，调节生化指标表达，其机制与抑制MAPK信号通路有关;结合代谢组学发现黄连解毒汤可影响不同代谢通路减缓炎症反应发生。本研究初步阐释了黄连解毒汤的解热抗炎药理作用及分子机制，为进一步拓展研究提供实验基础及理论支撑。
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