摘要
鸽是典型的单态性鸟，通过简单外貌特征很难区分其性别，这给鸽育种、养殖带来很大的困难。目前鸽性别鉴定主要依靠有经验的养殖人员肉眼区分，这种方法准确率不高，不适合应用于早期幼鸽的性别判定。本研究主要通过提取鸽血液、羽毛样品基因组DNA，分别进行PCR反应、LAMP反应、双重LAMP反应判定性别，并对部分鸽进行解剖观察性腺器官验证结果的准确性，建立早期幼鸽PCR反应、LAMP反应、双重LAMP反应性别鉴定体系，为解决幼鸽性别鉴定困难提供方法。研究结果如下： 1、建立了早期幼鸽PCR反应性别鉴定体系。试验一：以65只成年鸽血液样品基因组DNA模板为对照组，羽毛样品提取的基因组DNA为试验组，依据CHD1基因特异性进行PCR性别鉴定建立一种快速提取羽毛样品基因组DNA及性别鉴定的方法，同一个体血液样品基因组DNA与羽毛样品基因组DNA扩增结果相同，雄性样品可扩增出一条446 bp的条带，雌性样品可扩增出326 bp和446 bp的两条条带，PCR性别鉴定结果与性腺器官观察结果一致；试验二：以优化好的羽毛提取方案及PCR性别鉴定体系为基础，对100只已知性别，200只未知性别的早期幼鸽进行性别鉴定，结果显示：100只已知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA检出率为100%，与性腺器官观察结果一致率为98%，200只未知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA检出率为90%；试验三：进行重复验证，通过提取羽毛样品基因组DNA，对3000只鸽进行PCR反应性别鉴定，检出率为90.4%。 2、建立了早期幼鸽LAMP反应性别鉴定体系。试验一：以成年鸽血液基因组DNA为模板，设计LAMP反应引物，利用引物GAPDH、Sex分别进行扩增，并对反应条件进行优化，确定了引物最适退火温度为62℃，最适反应时间为45 min，同一个体LAMP反应扩增结果与PCR反应结果一致；试验二：通过添加1μL 1000× SYBR GreenⅠ核酸染料优化检测方式，建立可视化LAMP性别鉴定反应体系；试验三：进行重复验证，对100只已知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA进行可视化LAMP反应性别鉴定，检出率为97%，同一个体可视化LAMP反应扩增结果与PCR反应结果、性腺器官观察结果一致率均为90.7%。 3、建立了早期幼鸽双重LAMP反应性别鉴定体系。试验一：以成年鸽血液基因组DNA为模板，利用荧光标记的引物GAPDH、Sex分别进行扩增验证了荧光标记引物的有效性；试验二：利用荧光标记引物GAPDH、Sex进行双重LAMP反应，对反应条件进行优化，确定了引物最适浓度比为1∶3，最适PEI浓度为1 mol/L；试验三：进行重复验证，对100只已知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA进行双重LAMP反应性别鉴定，检出率为98%，同一个体双重LAMP反应扩增结果与PCR反应结果一致率为94.9%，与性腺器官观察结果一致率为96.9%。 综上所述，本研究建立了3种用于幼鸽性别鉴定的方法，双重LAMP反应与LAMP反应相比具有较高的检出率和准确性，为现场快速鉴定幼鸽性别提供了方法，具有良好的应用前景。
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