摘要
目的:探究鹿茸大补汤通过调控WNT5A和TLR4信号通路调节NF-κB/MMP-9如何影响哮喘小鼠气道重塑。 方法:本研究对SPF级6周龄的50只BALB/c小鼠进行了随机分组，包括正常组、模型组、鹿茸大补汤高剂量组、鹿茸大补汤低剂量组和地塞米松组。除正常组外，其余4组分别在第1天、第7天、第14天和第15天分别进行腹腔注射0.2毫升OVA,第16天开始模型组、低剂量组、高剂量组和地塞米松组分别用1％卵清蛋白溶液进行超声雾化激发，每隔一天一次，持续8周。造模第16天开始，正常组和模型组在激发前一小时每只灌胃200微升生理盐水，而治疗组则分别灌胃同等量的鹿茸大补汤和地塞米松溶液。实验组分为低剂量组和高剂量组，分别灌胃给药150mg/kg和300mg/kg的药物，地塞米松组给药0.5mg/kg,每只动物每天一次，共持续8周。实验结束后，末次给药后24小时处死实验动物，并妥善保存。 检查指标:本研究通过测定气道阻力确认病理模型建立成功，采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞和炎性细胞种类及水平。同时，采用流式细胞术检测脾和淋巴结中IL-4和IFN-γ的表达情况。另外采用多种方法对肺组织进行观察和检测，其中包括使用HE染色法观察病理改变，使用MASSON染色法观察气道周围的胶原沉积。此外,还使用Western blot检测肺组织中WNT5A、TLR4、NF-κB和MMP-9的表达水平，使用免疫组化法检测肺组织中NF-κB和MMP-9的表达水平，以及使用免疫荧光法检测肺组织中WNT5A、TLR4、NF-κB、MMP-9的表达水平。这些方法的综合应用可以更全面地了解肺组织的状况。 结果:(1)吸入不同浓度的组胺后小鼠气道阻力逐渐升高，与正常组相比，模型组小鼠的气道阻力显著增大(P＜0.05)。与模型组相比，鹿茸大补汤治疗组的气道阻力显著减小(P＜0.05),表明模型成功。(2)ELISA法结果显示BALF中的炎症细胞数和炎症因子水平，发现模型组相比于正常组，其嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量以及IL-4、IL-5、IL-13水平均显著升高(P＜0.05)。而治疗组相比于模型组，这些指标水平均显著降低(P＜0.05),其中地塞米松组和高剂量组的治疗效果优于低剂量组。这些结果表明，该治疗方案可以有效地降低炎症细胞和炎症因子的水平，并且高剂量组的效果更佳。（3）流式细胞术:与正常组相比，模型组哮喘小鼠淋巴结和脾细胞中IL-4和IFN-γ含量增多;与模型组相比，治疗组哮喘小鼠淋巴结和脾细胞中IL-4和IFN-γ含量降低，且地塞米松组和高剂量组的效果好于低剂量组。（4）肺组织病理学观察:使用HE染色法对肺组织进行观察。在高倍镜下，与正常组相比，其他组小鼠的肺组织可见明显的气道损伤、炎性细胞浸润、上皮细胞破损、气道壁增厚和气管腔容积变小，表现为明显的气道炎症和肺组织损伤。而地塞米松组和高剂量组的治疗效果明显优于低剂量组。使用MASSON染色法观察小鼠气道周围胶原沉积情况，在高倍镜下观察到正常组小鼠气道几乎不存在蓝色的胶原沉积，而模型组小鼠明显增加，治疗后胶原沉积减少，其中地塞米松组和高剂量组的效果更为明显，低剂量组效果相对较弱。（5）肺组织的Western blot检测:与正常组相比，模型组WNT5A、TLR4、NF-κB和MMP-9表达增加;与模型组相比，治疗组WNT5A、TLR4、NF-κB和MMP-9表达减少，且地塞米松组和高剂量组的效果好于低剂量组。（6）免疫组化法（IHC）:与正常组相比，模型组气道周围棕黄色聚集明显，证明NF-κB和MMP-9表达明显;与模型组相比，治疗组气道周围棕黄色聚集减轻，且地塞米松组和高剂量组的效果好于低剂量组，证明NF-κB和MMP-9表达减轻。（7）免疫组织荧光法（IF）:与正常组相比，模型组气道荧光亮度明显，证明WNT5A、TLR4、NF-κB和MMP-9表达增加;与模型组相比，治疗组气道荧光亮度降低，证明WNT5A、TLR4、NF-κB和MMP-9表达减轻，且地塞米松组和高剂量组的效果好于低剂量组。 结论:（1）鹿茸大补汤能降低炎性因子和炎性细胞的数量。（2）鹿茸大补汤能缓解肺部病理性变化。（3）鹿茸大补汤通过调控WNT5A和TLR4信号通路降低NF-κB/MMP-9的表达，从而抑制气道重塑的发生，缓解支气管哮喘。
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