摘要
本论文在凡纳滨对虾饲料中添加牛乳铁蛋白肽，研究其对凡纳滨对虾的生长性能、免疫能力和生长相关基因产生的变化，并且通过转录组测序技术分析牛乳铁蛋白肽对凡纳滨对虾代谢的影响机制。实验共分5组，以粗蛋白和粗脂肪分别为42%和8%的饲料为基础饲料，在基础饲料（对照组）中添加4个不同梯度的牛乳铁蛋白肽制成实验饲料：LCB1组（基础饲料+1.0‰牛乳铁蛋白肽）；LCB1.5组（基础饲料+1.5‰牛乳铁蛋白肽）；LCB2组（基础饲料+2.0‰牛乳铁蛋白肽）；LCB2.5组（基础饲料+2.5‰牛乳铁蛋白肽）。挑选规格相近的600尾初重为(3.51±0.06)g的凡纳滨对虾，随机放入15个网箱，每个网箱40尾，在网箱中养殖56天，结果表明： （1）适量牛乳铁蛋白肽对凡纳滨对虾的生长及消化能力具有积极影响。LCB1.5组和LCB2组的增重率显著高于对照组和LCB1组(P＜0.05)，并且在LCB1.5组达到最大。LCB1.5组的特定生长率最大，并且显著高于对照组和LCB1组(P＜0.05)。关于牛乳铁蛋白肽对对虾存活率的影响，在LCB1.5和LCB2.5组具有最佳的效果，并且显著高于对照组(P＜0.05)。对照组的饲料系数显著高于牛乳铁蛋白肽添加组(P＜0.05)。与其他组相比，LCB2.5组的肝胰腺中淀粉酶活性明显较高(P＜0.05)。实验组的肝胰腺中脂肪酶活性显著升高(P＜0.05)。LCB1.5组、LCB2组和LCB2.5组的TOR基因表达量显著高于对照组和LCB1组(P＞0.05)。LCB2.5组中Raptor基因的表达量最高，显著高于其他组（P＞0.05）。4E-BP基因表达量在LCB2.5组达到最高，显著高于其他组(P＞0.05)。eIF4E2基因在LCB2组中表达量最高，并且显著高于LCB2.5组、LCB1组和对照组(P＞0.05)。LCB1.5、LCB2和LCB2.5组的eIF4E2基因的相对表达水平明显高于对照组(P＜0.05)。 （2）牛乳铁蛋白肽对凡纳滨对虾的肠道微生物存在影响。分析表明：基础组和实验组凡纳滨对虾肠道微生物的多样性指数不存在显著性差异(P＞0.05)。实验组中除LCB1.5组外，其余3组的ACE指数和Chao指数均略有升高，根据群落柱形图显示在门水平上基础组和实验组的优势种均是变形菌门，但是随着牛乳铁蛋白肽添加量的升高，变形菌门呈现下降趋势，厚壁菌门呈现上升趋势；且随着添加量的升高，弧菌属已呈明显的下降趋势。 （3）牛乳铁蛋白肽对凡纳滨对虾的免疫能力具有促进作用，且有剂量效应。LCB1组的总胆固醇含量显著高于LCB2组和LCB2.5组。对照组的谷草转氨酶含量最高。肝胰腺中碱性磷酸酶的活力，当牛乳铁蛋白肽添加量超过1.5‰时，肝胰腺中碱性磷酸酶的活性显著升高(P＜0.05)。对照组肝胰腺中酸性磷酸酶活力最低，并且与LCB1.5组、LCB2组和LCB2.5组存在显著性差异(P＜0.05)；LCB2组的酸性磷酸酶活力最高，并且显著高于LCB1组和对照组(P＜0.05)。对照组的超氧化物歧化酶的活力显著低于LCB1.5组和LCB2.5组(P＜0.05)。肝胰腺中丙二醛的含量在对照组中含量最高并且显著高于LCB1.5组、LCB2组和LCB2.5组(P＜0.05)，总体来看，丙二醛含量随着牛乳铁蛋白肽的添加量升高呈现逐步下降的趋势。实验组的Relish基因表达量显著升高(P＜0.05)，并且随着牛乳铁蛋白肽的添加量的升高Relish基因的相对表达量也随之上升，在LCB2.5组达到最高表达量。Toll基因表达量存在显著差异(P＜0.05)。JAK基因的相对表达量随着牛乳铁蛋白肽的含量升高而显著上升，并且在LCB2.5组达到最大表达量，LCB1.5组、LCB2组和LCB2.5组显著高于对照组(P＜0.05)。STAT基因的相对表达量的趋势与JAK基因相似，均随着牛乳铁蛋白肽的添加量升高而增加。LCB1.5组、LCB2组和LCB2.5组的对虾的累计死亡率明显低于LCB1组和对照组(P＜0.05)。LCB1组和对照组之间的累积死亡率没有明显差异(P＞0.05)。 （4）基于转录组分析，牛乳铁蛋白肽对凡纳滨对虾的代谢能力存在一定的影响。对LFB1.5组和对照组的差异基因进行筛选，654个差异基因被检出，检测435个上调基因，219个下调基因。大量的差异基因富集在凡纳滨对虾代谢相关的通路中，并且与糖脂代谢相关的差异尤为显著。 综上所述，牛乳铁蛋白肽能够有效提高凡纳滨对虾的生长性能、存活率、消化能力和免疫能力，并且牛乳铁蛋白肽能显著改善凡纳滨对虾的肠道微生物组成，对弧菌等致病菌有良好的抑制作用。在此实验条件下，合适的添加量为1.5‰。这些结果对于理解牛乳铁蛋白肽在对虾健康管理中的作用以及在对虾养殖中有效和适当地应用抗菌肽具有重要的参考价值。
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