摘要
肺纤维化是一种进行性的、致命的纤维性间质肺疾病，其特征是成纤维细胞增殖和细胞质基质过度沉积，导致肺结构不可逆转的改变。一线用药吡非尼酮、尼达尼布虽可一定程度上延缓病情进展，但是对患者胃肠道、肝功能和皮肤等产生多种副作用，且价格昂贵，严重限制了药物的临床应用。因此，亟需寻找更加有效、安全、经济的抗纤维化药物。黄连素是一种天然生物碱，对肾纤维化、心肌纤维化和肝纤维化显示出良好的治疗效果，且毒副作用极低，但其对肺纤维化的治疗效果目前尚不清楚。因此，本课题将探讨黄连素对肺纤维化的治疗效果并对其可能的作用机制进行初步探讨。 本文构建小鼠肺纤维化模型，通过Hamp;E染色、Masson染色、免疫荧光染色和羟脯氨酸的含量测定，评价黄连素对体内肺纤维化的治疗作用；构建体外肺纤维化模型，通过划痕实验和Transwell实验评价黄连素对体外肺纤维化的治疗作用。通过WesternBlotting实验检测EMT信号通路表达水平，探讨黄连素对EMT信号通路的影响。利用IPA预测黄连素作用于肺纤维化靶点并对靶点进行验证。利用CCL19过表达载体，通过划痕实验、Transwell实验和检测EMT信号通路的表达水平阐明CCL19在黄连素在治疗肺纤维化中的作用。 研究结果表明，黄连素可以减轻小鼠肺纤维化程度，降低α-SMA的表达水平和血清中羟脯氨酸的含量；黄连素可以抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞的侵袭和迁移能力；证明黄连素对肺纤维化具有明显的治疗效果。黄连素在体内和体外均通过抑制EMT信号通路治疗肺纤维化。IPA构建了黄连素治疗肺纤维化的药理网络，筛选出了黄连素治疗肺纤维化的调控靶点，分别为STAT1,MMP-1,PPARG,IL-19,IL-6,BAX,NF-κB,STAT3,ICAM-1,TNF-α,IFNG,IL-17A,PPARD,TGF-β1,PTGS2,IL-1β,FN1；通过IPA预测所筛选的调控靶点的共同上游调控子，分别为PTGER1,ALOX15,SAA1,PCSK1,IL-19,CCL19。WesternBlotting和RT-PCR实验表明在肺纤维化小鼠中CCL19高表达，给予黄连素治疗后CCL19表达降低。过表达CCL19削弱了黄连素对成纤维细胞侵袭和迁移能力的抑制作用，并且重新激活了黄连素对EMT信号通路的抑制作用。证明黄连素可以通过抑制CCL19抑制EMT信号通路治疗肺纤维化。
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