摘要
肌肉生长抑制素（Myostatin，MSTN）是骨骼肌生长的负调控因子，特异性抑制骨骼肌细胞的增殖和分化，在骨骼肌和脂肪的生长发育中起重要作用。最近研究表明，MSTN不仅调节肌肉的生长和发育，而且在肌纤维类型中起重要作用，MSTN缺失可以改善骨骼肌中快肌（Ⅱ型）纤维的形成，但MSTN在肌纤维类型中的作用机制尚不清楚。本研究以特克塞尔公羊（AA）×阿勒泰母羊（GG）杂交得到F1代后再杂交的横交F2代羊为实验群体，对208只不同基因型F2代羊的体重、体尺及胴体性状指标测量，且进行关联分析。分析MSTN3''UTRg+6723G＞A突变与绵羊肌纤维类型的关系，并通过绵羊成肌细胞验证了MSTN基因对成肌细胞分化类型的影响，旨在阐明MSTN对肌纤维形成的影响，揭示MSTN基因对绵羊肌纤维类型的影响和作用机理，为提高绵羊综合生产性能提供理论依据。全文结果如下： （1）横交F2代羊MSTN基因3''UTRg+6723G＞A位点检测出3种基因型，A、G两个等位基因。其中基因型频率以AG型最高，AA型最低，G为优势等位基因；关联分析发现，公羊和母羊在体重、胴体重、左带臀腿重、左5肋重方面存在差异（P＜0.05）；在不同基因型中AA型的体重、胴体重、左带臀腿重量显著高于GA与GG基因型（P＜0.05），GG型尾部脂肪显著高于AA型（P＜0.05），GA型尾部脂肪与GG型无显著性差异（P＞0.05），在不同基因型间AA与GG型出生重、眼肌长、臀宽差异显著（P＜0.05），其他指标无显著性差异（P＞0.05）。（2）横交F2代背最长肌不同基因型间肌纤维直径差异极显著（P＜0.01），不同基因型间肌纤维横截面积、数量差异性显著（P＜0.05）。应用ATP酶染色（pH9.6）浅色为Ⅰ型，深褐色为ⅡB型，介于浅色和深褐色之间的中间色为ⅡA型纤维。AA型Ⅰ型纤维最少、ⅡA型纤维最多、ⅡB型纤维较多。GG型中Ⅰ型纤维最多、ⅡA型纤维最少。AG基因型Ⅰ型、ⅡB型纤维居中。在不同基因型中Ⅰ型（慢型）肌纤维比例差异极显著（P＜0.01），不同基因型中Ⅰ型肌纤维数量差异显著（P＜0.05），三种基因型中AA型的Ⅰ型肌纤维数量、比例最少，GG型最多；不同基因型中Ⅱ型（快肌）肌纤维的数量、比例差异显著（P＜0.05），与Ⅰ型相反，AA型的Ⅱ型肌纤维数量、比例最多，GG型最少。（3）MSTN过表达细胞诱导分化后，MyHCⅠ型肌纤维数量显著高于Mock对照，当MSTN受到干扰后（MSTN+shR218），Ⅰ型肌管数量明显降低，表明MSTN促进了Ⅰ型肌纤维的生成。MSTN过表达后，CaN基因表达水平与MSTN高度一致，同时MyHCⅠ基因表达受到CaN基因表达高低发生变化，但是MyHCⅡ基因的表达并未与CaN保持一致，该结果表明MSTN并未调控Ⅱ型肌纤维的生成。MSTN与si-CaN（受到干扰的CaN）共同成肌细胞，抑制分化效果更加显著。当MSTN被干扰后，该基因的抑制作用被解除，分化肌管率融合率升高。这提示我们，MSTN基因可能通过CaN基因信号通路抑制成肌细胞的分化类型，但不是通过MEF2C通路。
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