摘要
目的：观察黄杨碱、黄杨碱联合阿苯达唑对体外培养的细粒棘球蚴原头节活性的影响，并进一步探究黄杨碱抗细粒棘球蚴原头节的作用机制。 方法：在无菌条件下，取新鲜处死的感染囊型棘球蚴病的羊肝组织，收集得到细粒棘球蚴原头节，将原头节培养在含有10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的RPMI-1640培养基中，并置于37℃、5%CO2培养箱内培养待用。将不同浓度的黄杨碱（ 20、40、80、120、160μmol/L ）、阿苯达唑（ 50μmol/L ）、黄杨碱联合阿苯达唑（ 20μmol/L+50μmol/L ）分别和细粒棘球蚴原头节培养，在培养的第6小时、第12小时、第1天、第3天、第5天、第7天、第9天，分别用台盼兰染色，镜下观察原头节活力，实验独立重复3次，计算原头节的死亡率并绘制原头节活力曲线图；运用 Western Blot技术检测黄杨碱对体外细粒棘球蚴原头节中Bax、Bcl-2蛋白表达的变化；运用活性检测试剂盒检测黄杨碱对原头节中Caspase-3、Caspase-9蛋白活性的影响；运用JC-1试剂盒检测原头节细胞中线粒体膜电位变化；运用透射电镜（TEM）观察原头节内部超微结构的改变。 结果：体外培养细粒棘球蚴原头节1d后，空白对照组和DMSO组的原头节活性率无明显变化，分别为98.33±2.08%和98.67±1.53%，不同浓度的黄杨碱（ 20、40、80、120和160μmol/L ）处理后的原头节活性率为80.67±4.16%、57.00±4.58%、32.67±4.04%、24.67±3.51%和16.00±2.65%，表明黄杨碱可有效抑制体外细粒棘球蚴原头节的生长，且呈现出时间和浓度依赖性。以原头节活性率为 25%作为终点比较，阿苯达唑组（ 50μmol/L ）、低浓度黄杨碱组（20μmol/L）用时均约7天，而联合用药组（20μmol/L黄杨碱+50μmol/L阿苯达唑）用时约3天，且各组体外作用原头节9天后，原头节活性率分别为17.00±4.36%、12.00±2.00%和0.33±0.18%，表明联合用药组相较于单药组更能有效抑制原头节生长，且起效更快。不同浓度的黄杨碱（40、80、120μmol/L）处理原头节 1天后，Bax蛋白表达、Caspase-3与 Caspase-9蛋白活性较空白对照组、DMSO组增高，Bcl-2蛋白表达降低，呈现出浓度依赖性，具有统计学意义（ p ＜ 0.05 ）。培养 1天后，空白对照组和 DMSO组的原头节细胞线粒体膜电位未见明显差异，不同浓度黄杨碱组（40、80、120μmol/L ）的原头节细胞线粒体膜电位随药物浓度下调，具有统计学意义（ p ＜ 0.05 ）。透射电镜下观察，空白对照组和DMSO组的原头节细胞内各种结构完整，在加入不同浓度的黄杨碱（40、80、120μmol/L）培养后，细胞内各种结构松散，凋亡小体增加，且随着黄杨碱浓度增加，这些变化更加严重。 结论：1.黄杨碱能有效抑制体外细粒棘球蚴原头节的生长，且呈现出时间和浓度依赖性。 2.黄杨碱联合阿苯达唑能有效抑制体外细粒棘球蚴原头节的生长，且起效更快。 3.黄杨碱可能通过线粒体途径诱导细粒棘球蚴原头节凋亡。
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