摘要
曼地亚红豆杉(Taxus × media Rehder)是以欧洲红豆杉为父本、东北红豆杉为母本的天然杂交品种，是雌雄异株的典型树种。目前，曼地亚红豆杉的性别鉴别仍停留在雌树结实期，尚无曼地亚红豆杉非花果时期有效的性别鉴别方法。本试验以校园内不同性别曼地亚红豆杉植株叶片为材料，利用RAPD分子标记技术寻找与曼地亚红豆杉性别相关的分子标记，并对曼地亚红豆杉不同生长时期的雌雄株生理生化指标进行分析，试验结果如下: 1.曼地亚红豆杉多酚氧化酶(PPO)活性含量在不同时期雄株均高于雌株,过氧化物酶(POD)活性含量在展叶期雌株高于雄株，在开花期、结果期、种子成熟期雄株POD含量均高于雌株。曼地亚红豆杉超氧化物歧化酶(SOD)活性含量在展叶期和开花期雌株活性高于雄株，在结果期和种子成熟期雄株高于雌株,呈显著性差异。曼地亚红豆杉多糖含量在展叶期、结果期、种子成熟期为雌株高于雄株，在开花期为雄株高于雌株，呈显著性差异。曼地亚红豆杉在不同生长时期雌雄株的叶绿素、类胡萝卜素、黄酮、多酚的含量相近。 2. 用改良的尿素法提取曼地亚红豆杉基因组DNA,以曼地亚红豆杉叶片基因组DNA为材料,对其RAPD反应体系进行了优化,结果为:总反应体系为25 μL,10×PCR Buffer 2.5 μL,DNA模板 30 ng,引物浓度为 0.6μmol·L-1,dNTP浓度为1.0mmol·L-1,TaqDNA聚合酶浓度为 2.0 U,Mg2+浓度为 2.5 mmol·L-1。RAPD扩增反应程序为:95℃预变性3min,94℃变性1min,39℃退火1min,72℃延伸2 min,40个循环，循环结束72℃延伸5 min。 3. 利用86个RAPD引物对不同性别的曼地亚红豆杉基因组DNA进行了RAPD分析研究，结果表明，47个引物可以扩增出3条以上清晰的条带，其中OPG-04(5''-AGCGTGTCTG-3'')和OPM-09(5''-GTCTTGCGGA-3'')在雌雄株基因池中出现了差异，重复试验，OPG-04在雌株上扩增出一条1200 bp左右的特异带，OPM-09在雄株上扩增出一条1100 bp左右的特异带。
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