摘要
随着我国规模化猪场的发展逐步走向成熟，猪场生物安全和疫病防控技术研究不断革新，动物疫病从有效控制到逐步消灭、净化。其中猪瘟和伪狂犬是阻碍我国规模化猪场健康稳定发展的两大重要疫病，垂直传播等多种因素是猪瘟和伪狂犬一直在猪场内流行并难以根除的重要原因。因此，本研究基于中国动物疾病预防控制中心印发的《动物疫病净化示范场评估标准（2021版试行）》为参考，对安徽淮北某猪场开展猪瘟和伪狂犬的免疫净化监测和病原检测工作，针对猪瘟、伪狂犬两种病毒病，开展以下相关研究： 1、规模化猪场猪瘟、伪狂犬的免疫抗体水平监测和初步净化 本研究分别于2022年的3月份、7月份和11月份共采集安徽省某种猪场的后备猪、生产母猪和种公猪的1342份血样进行CSF和PR的免疫抗体ELISA监测，结果显示，3月份所采集的518份样本中生产母猪和种公猪的猪瘟抗体阳性率均在95%以上（299/309）、（77/78），而后备猪的猪瘟抗体阳性率仅60%（79/131）；伪狂犬gE抗体阳性率后备猪和种公猪分别为30%和29%（40/131）、（23/78）生产母猪的抗体阳性率高达60%（186/309）；伪狂犬gB抗体阳性率分别为后备猪53%（70/131）、生产母猪95%（296/309）、种公猪100%（78/78）；7月份采集样本448份，其中生产母猪和种公猪的猪瘟抗体阳性率趋于稳定分别为96%和93%（91/94）（70/75）、后备猪的伪狂犬gB抗体阳性率由三月份的60%升至84%；伪狂犬gE抗体的阳性率分别下降至后备猪18%（53/279）、生产母猪28%（27/94）和种公猪17%（13/75）；生产母猪和种公猪的伪狂犬gB抗体阳性率趋于平稳分别为96%（91/94）和100%（75/75）、后备猪的伪狂犬gB抗体阳性率由三月份的53%上升至77%（215/279）；十一月份共采集376份样本，其中生产母猪、种公猪的猪瘟抗体阳性率趋于平稳分别为96%（96/100）和100%（70/70）后备猪的抗体阳性率上升至91%，后备猪、生产母猪、种公猪的伪狂犬gE抗体的阳性率下降至11%（23/206）、17%（17/100）和13%（9/70）；后备猪、生产母猪、种公猪伪狂犬 gB 抗体的阳性率依次为 97%（200/206）、98%（98/100）、100%（70/70）。该监测结果表明该场的免疫净化方案效果显著，为后期实现猪瘟和伪狂犬免疫净化奠定基础。 2、规模化猪场伪狂犬病原学检测及双重PCR诊断方法的建立 收集该场日常生产过程中临床出现疑似病料包括病猪、病死猪以及流产胎儿共计103份病料进行普通PCR检测，结果发现103份样本中未检测出猪瘟阳性病料，有4份混样存在gE基因野毒感染，设计相关引物进行gE基因全长扩增、gB基因的PCR鉴定以及gE和gB的双重PCR诊断方法，经测序和质粒提取后进行生物信息学分析结果表明：分离到的伪狂犬AHhb-01株gE基因的核苷酸序列与国内外参考毒株的同源性高达 97.9%~99.9%，氨基酸同源性为 95.8%~100%，核苷酸比对结果发现在第136~138位置处有三个“GAC”碱基的插入，在第1466~1468位置处有三个“GCG”碱基的增添，氨基酸在第56位置处和496位置处各有一个“天冬氨酸（D）”的插入。遗传进化结果表明：AHhb-01 株与 2020 年河北分离的 2020-HB-XT PRV-gE 基因的亲缘性最高，同属于伪狂犬变异毒株。在单一PCR的基础上建立并优化的PRV-gE和gB双重PCR灵敏性强，最低检测限度为5.02×10-7ng/μL，且检测特异性较好，该双重PCR检测方法对该场后续进行流行病学监测和疫病防控等工作具有重要意义。 3、疫病净化与无疫小区建设信息系统V1.0的构建 为更好的开展后续净化工作，并响应国家推动数字农业和智慧农业的发展，我们以规模化猪场免疫监测和疫病净化过程中重要信息为出发点，通过规模化猪场实际净化工作需要，以数据共享管理和专家远程诊断等为设计理念，采用 Java 编写语言， MySQL 数据库，B/S 结构为基础，开发规模化猪场疫病净化与无疫小区建设信息管理系统，其中包括猪场疫病净化检测标准、检测信息管理、疫病净化审查评分、猪病远程诊断（线上远程诊断、实验室诊断）以及生猪生产猪病防治知识库等模块，实现规模化猪场免疫净化过程中的数据智能管理与疫病远程诊断。系统可根据猪场结构合理分配角色包括兽医、员工、专家等，依据登陆的账号权限不同完成不同的职能分工，通过系统调试，净化猪场可实现数据的上传和导出，以及专家远程诊断和生成诊断报告。
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