摘要
目的: 本研究旨在通过构建斑蝥素固体脂质纳米粒药物递送系统，有效解决斑蝥素(Cantharidin,CTD)水溶性差、毒性大、体内消除快等问题。同时本研究探索斑蝥素固体脂质纳米粒增效减毒的作用机制，从细胞和动物水平进行探究，为介入联合斑蝥素治疗肝癌做出基础实验铺垫。 方法: 1.采用薄膜超声分散法制备斑蝥素固体脂质纳米粒(Cantharidin solid lipid nanoparticles,CTD-SLN),并通过纳米粒的表面形态、粒径、PDI、Zeta、包封率、载药量及体外药物释放度指标进行制剂学评价。 2.采用细胞摄取实验考察固体脂质纳米粒对药物递送的能力。采用CKK-8法测定CTD-SLN的细胞毒作用，并对CTD-SLN和CTD单独用药之间的差异进行评估。采用流式细胞术考察CTD-SLN对人肝癌细胞HepG2的凋亡作用和对细胞周期的影响。进行溶血和凝血性实验来检测CTD-SLN对静脉注射的影响，并评估它们的生物相容性。 3.通过在裸鼠左腋皮下注射HepG2细胞构建荷瘤裸鼠模型，评估CTD-SLN在体内对肿瘤的效应，包括肿瘤体积和质量等指标。使用TUNEL法检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况，并通过HE染色观察裸鼠的肿瘤和主要器官的组织切片。 结果: 1.制备斑蝥素脂质体:用薄膜超声分散法制备斑蝥素固体脂质纳米粒，磷脂和胆固醇的质量比为10∶1,超声处理总时长10min,间隔1s,超声功率220W,斑蝥素投药量为7mg。得到的斑蝥素脂质体外观良好，呈乳光状，粒径大小为120.8 nm左右,PDI为0.261,电位为-29.90mv,包封率在96.20％以上，最高载药量可达14.30％,48小时体外累积释放为60％左右。 2.细胞摄取实验:结果显示与游离斑蝥素相比，固体脂质纳米粒更能有效递送药物到细胞。细胞毒性实验:使用HepG2细胞进行体外细胞实验，结果显示CTD-SLN和斑蝥素对HepG2细胞均具有显著浓度依赖性的毒作用(P＜0.01),IC50值分别为1.415μg/ml和4.971 μg/ml。根据流式细胞术的结果发现CTD-SLN组的细胞凋亡率为44.21±5.15％,CTD-SLN能够使细胞停滞在S期，并使其百分占比提高(P＜0.01)。溶血性和抗凝血实验:溶血性实验结果表明CTD-SLN对红细胞没有产生破坏进而产生溶血问题，抗凝血实验结果BCI值显示CTD-SLN具备抗凝作用。 3.荷瘤裸鼠试验:从荷瘤裸鼠实验结果表明，CTD-SLN能有效抑制肿瘤生长,其抑制率可达到62.4％,且CTD-SLN治疗期间未对裸鼠体重产生显著影响。对比DDP组，CTD-SLN组的抗肿瘤效果更好(P＜0.01),且HE染色结果显示未见明显的细胞形态和结构变化。TUNEL法结果显示CTD-SLN组肿瘤细胞的凋亡率明显高于DDP组。 结论: 本研究成功制备了粒径均一、包封率高、载药率高、体外释放缓慢且稳定性良好的斑蝥素固体脂质纳米粒。成功解决了斑蝥素脂溶性且在体内消除过快的问题，同时提高了药物在体内肿瘤部位的蓄积，延长了药物在体内的滞留时间。斑蝥素固体脂质纳米粒的制备能够增强抗肿瘤效应，可通过抑制细胞的增殖率、诱导肝癌细胞凋亡以及阻滞肝癌细胞的周期等多种途径治疗肝癌。这一发现提供了斑蝥素治疗肝癌的可行策略和方案。
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