摘要
近年来，糖尿病的患病率明显增加。糖尿病已成为威胁人类健康的慢性代谢性疾病之一，因此对2型糖尿病的防治具有重要意义。 目前认为，胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能缺陷引起的胰岛素分泌不足或相对不足是2型糖尿病的病理基础。而胰岛β细胞是分泌胰岛素的重要细胞，在维持人体内正常血糖方面起着重要作用。因此，积极保护胰岛β细胞是防治糖尿病的关键。现代医学研究了胰岛β细胞损伤的多种机制，如内质网应激、氧化应激、自噬、炎症因子等，这些具有维持细胞稳态、保护细胞功能的特点。一旦调节异常，会导致胰岛β细胞功能障碍，影响胰岛素的正常分泌，继而发展为糖尿病。中医对糖尿病的认识和治疗历史悠久，积累了丰富的理论和临床经验。糖尿病在中医中属于“消渴病”范畴，其病因有先天禀赋不足、劳倦内伤、情志失调、饮食不节、外感邪气、个人体质等。历代医家对糖尿病的病机有很多认识，提供了新的治疗思路，为中医药防治糖尿病提供了理论依据。 代谢组学是继基因组学和蛋白质组学之后的一门学科，广泛应用于各个研究领域。代谢组学技术用于分析代谢水平差异，发现差异代谢物，有助于筛选生物标志物和差异代谢物代谢途径。代谢组学与中医的“整体观”相一致，目前应用于中医证候、中药复方等研究，探索中医防治疾病的机制，为进一步的临床治疗提供依据。大量临床研究已表明，干姜黄芩黄连人参汤可以降低高血糖水平，保护胰岛β细胞，改善胰岛素抵抗，延缓糖尿病的发展，但其具体作用机制尚不清楚。为了达到更好的疗效，在干姜黄芩黄连人参汤基础上加味后，利用代谢组学技术对其相关的差异代谢和代谢途径进行研究和分析。 实验研究: 目的: 1、观察加味干姜黄芩黄连人参汤对糖尿病模型小鼠（db/db小鼠）一般情况、体重、饮水量、摄食量及胰岛β细胞功能的影响。 2、通过病理学观察加味干姜黄芩黄连人参汤对糖尿病模型小鼠（db/db小鼠）胰腺组织的保护作用。 3、基于代谢组学探讨加味干姜黄芩黄连人参汤对糖尿病模型小鼠（db/db小鼠）血清差异代谢物及代谢途径。 方法: 严格按照广州中医药大学实验动物委员会制定的管理和使用规则，以5周龄db/db糖尿病模型小鼠和同龄C57BL/6J背景雄性小鼠为研究对象，在SPF级实验动物中心饲养，每笼5只，达到成模标准后，将小鼠按随机数字表法随机分为模型组(DM)、加味干姜黄芩黄连人参汤中剂量组(JQL,10.75g/kg/d)、加味干姜黄芩黄连人参汤高剂量组(JQL-H,21.5g/kg/d)、二甲双胍组(Met,0.163g/kg/d),每组 10 只;取 10 只同龄雄性C57BL/6J背景小鼠作为正常组(NC);每天灌胃1次，连续干预8周，各组小鼠自由饮水，予SPF级小鼠饲料喂养。观察小鼠的精神状态、摄食和饮水情况。在药物干预前、药物干预后每2周测量体重;干预前测量食物摄入量和饮水量，药物干预后每3周测量摄食量和饮水量。在药物干预8周结束时，进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)和腹腔胰岛素耐量试验(IPITT)。实验结束后取小鼠胰腺组织，观察胰腺组织结构、细胞形态以及NFκ-B、Bcl-2蛋白表达量的检测。采用小鼠血清进行代谢组学检测，筛选差异代谢物及代谢途径，探讨加味干姜黄芩黄连人参汤对胰岛β细胞保护作用机制。 结果: 1、观察加味干姜黄芩黄连人参汤对糖尿病模型小鼠(db/db小鼠)一般生活状态、体重、摄水量、摄食量及胰岛素功能的影响 实验过程中，在一般状态方面，正常组小鼠在精神状态、活动能力、毛色光泽度、反应能力等方面均明显优于模型组。加味干姜黄芩黄连人参汤、二甲双胍干预后，小鼠状态与模型组相比有改善。干预前，各组db/db小鼠的体重、摄水量、摄食量均与正常小鼠有显著差异，各组db/db小鼠之间无显著性差异;实验结束时，与模型组相比，加味干姜黄芩黄连人参汤及二甲双胍干预后db/db小鼠的体重、饮水量、摄食量均有所降低。口服糖耐量试验和腹腔胰岛素耐量试验结果显示，药物干预8周后，加味干姜黄芩黄连人参汤可改善db/db小鼠血糖调节能力和胰岛素抵抗。 2、观察加味干姜黄芩黄连人参汤对糖尿病模型小鼠(db/db小鼠)胰腺组织的保护作用。 胰腺HE染色结果显示，与正常组比较，每只db/db小鼠出现腺泡细胞脱颗粒;胰岛边界不清，胰岛体积缩小或增大，数量减少或缺失;胰岛细胞数量减少，胰岛导管增生，或伴有扩张。胰腺内及周围可见炎性细胞浸润。经加味干姜黄芩黄连人参汤治疗后胰腺组织的病变程度有所减轻。免疫组化结果显示，与正常组相比，模型组小鼠胰岛β细胞NFκ-B蛋白表达量增多，Bcl-2蛋白量减少;干预后，与模型组相比，加味干姜黄芩黄连人参汤中高剂量组鼠胰岛β细胞NFκ-B蛋白表达量减少，Bcl-2蛋白量增加。说明加味干姜黄芩黄连人参汤可改善胰岛β细胞的炎性反应并抑制细胞凋亡。 3、基于代谢组学探讨加味干姜黄芩黄连人参汤对糖尿病模型小鼠（db/db小鼠）差异代谢产物及代谢途径。 在本次研究的小鼠血清样本中筛选出了较多的差异代谢物，并结合差异代谢途径进一步筛选出差异代谢物，得到鞘磷脂（d18∶0/18∶1（11Z））、鞘氨醇、N-硬脂酰鞘氨醇-1-磷酸胆碱、肌醇、牛磺酸5个差异代谢物。通过KEGG代谢途径分析，这些代谢产物参与坏死、鞘脂信号通路、鞘脂类代谢的下调，ABC转运蛋白通路的上调密切相关，保护db/db小鼠的胰岛细胞功能。 结论 加味干姜黄芩黄连人参汤可缓解了 2型糖尿病“多饮”“多食”以及控制体重增加。同时可保护小鼠胰岛细胞结构形态，改善胰岛β细胞炎症反应和抑制胰岛β细胞凋亡以保护胰岛β细胞的功能。其主要机制通过调控鞘磷脂（d18∶0/18∶1（11Z））、鞘氨醇、N-硬脂酰鞘氨醇-1-磷酸胆碱代谢物使得坏死、鞘脂信号通路、鞘脂代谢通路的下调，以及调控肌醇、牛磺酸以此上调ABC转运蛋白通路。
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