摘要
随着人们生活水平的提高，渔业的发展越来越得到众人的关注，水产品也越来越受到大家的喜爱，但是日趋增长的鱼类疾病，不仅在养殖业上造成巨大的损失，对人体健康也有一定的威胁。脊椎动物的鼻腔组织会受到空气和水中众多化学诱导因子的影响，与此同时，存在于空气或者水中的多种病原体同样可以接触到鼻腔组织。在哺乳动物中，当受到病原感染时，鼻黏膜相关淋巴组织(NALT)可作为黏膜诱导部位来发生体液免疫，从而防止病原的侵袭，而在硬骨鱼类中也同样如此。硬骨鱼类中的IgT的功能类似于哺乳动物中的IgA。另外，硬骨鱼类中的NALT中包含众多的B细胞，并且其鼻腔黏膜中也包含了大量的免疫球蛋白(Immunoglobulins,Igs)，不同的免疫球蛋白发挥不同的作用。目前已有报道，硬骨鱼类中的免疫球蛋白IgT在抗小瓜虫感染时发挥了重要作用，然而，鼻腔中B细胞和各类免疫球蛋白是否可以诱导相关免疫反应来对抗鱼类的细菌感染，以及其中的适应性免疫机制又是如何，现在尚不得知。 假设将实验鱼浸泡于细菌中使其感染，细菌可以入侵到鱼类的鼻腔中，并且能够引起鱼类自身特异性免疫反应。为了验证该假设，我们使用1x106CFU/ml的浓度的柱状黄杆菌(Flavobacteriumcloumnare,FC)对虹鳟(Rainbowtrout,Oncorhynchusmykiss)成功构建了细菌浸泡感染模型。通过苏木素伊红染色(HE染色)来观察虹鳟鼻腔在受到柱状黄杆菌的感染后，其形态学变化，通过阿利新蓝染色(AB染色)来观察柱状黄杆菌浸泡感染虹鳟后，虹鳟鼻腔黏膜层黏液细胞数量的变化。同时，我们采用qRT-PCR技术研究了虹鳟被浸泡感染了柱状黄杆菌后，其鼻腔中免疫相关基因的表达情况。其次，我们还使用蛋白免疫印迹(Westornblotting,WB)实验技术来探讨在蛋白水平上，虹鳟鼻腔在感染了柱状黄杆菌后免疫球蛋白的表达情况，并且通过Pulldown实验检测了免疫球蛋白对感染后的虹鳟鼻腔的特异性结合情况。最后，在细胞水平上，我们通过免疫荧光(IF)和体内细胞增殖实验技术，检测IgT+Bcells以及EdU+IgT+Bcells的表达情况。 实验结果如下，通过HE染色和AB染色，与对照组相比，感染后鼻腔组织形态有所改变，鼻绒毛尖端缓慢变圆润，固有层变宽；通过qRT-PCR技术，部分免疫相关基因表达有所升高，其中IgT基因的表达在感染75d后有极显著的升高，并且在感染后75d，鼻黏膜上皮的杯状细胞有极显著的增加；而有趣的是，相对于对照组，在蛋白水平和细胞水平上检测发现，免疫球蛋白IgT的含量和IgT+Bcells数量都有升高，特异性结合的IgT蛋白的比例均可达到1:100，并且IgT+B细胞可以发生局部增殖。 综上所述，我们的研究结果表明，鼻黏膜适应性免疫反应与其他鱼类黏膜部位报道的免疫反应相似，免疫球蛋白IgT在黏膜免疫反应中起到了关键作用。本研究为之后更深一步地探讨鱼类鼻黏膜组织中的免疫反应提供了基础依据。
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