摘要
目的：维生素A（VitaminA，VA）水平与儿童呼吸系统感染关系密切，且VA能够促进呼吸道上皮细胞增殖、分化，但作用机制尚不明确。本研究旨在探索VA对正常或给予脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激的人主支气管上皮细胞的作用，以及是否通过调节线粒体功能影响细胞代谢，参与儿童呼吸道感染疾病。 方法：采用CCK-8法检测VA和LPS对正常人主支气管上皮细胞（Normalhumantrachealepithelialcell，HNTEC）增殖及毒性的影响，确定VA及LPS处理浓度。VA处理HNTEC细胞分组：对照组、0.1mg/LVA组、0.5mg/LVA组、2mg/LVA组；VA处理给予LPS刺激的HNTEC细胞分组：对照组、LPS组、0.1mg/LVA+LPS组、0.5mg/LVA+LPS组、2mg/LVA+LPS组。采用CCK-8法检测VA对给予LPS刺激的细胞存活率影响。采用细胞能量代谢仪检测VA对细胞线粒体有氧代谢的影响；采用qPCR分析VA处理正常/给予LPS刺激的细胞线粒体自噬相关基因p62、LC3B、PINK1的表达及线粒体DNA拷贝数水平；采用流式细胞术、WesternBlot检测VA处理后给予LPS刺激的细胞线粒体膜电位变化、细胞凋亡情况及线粒体自噬相关蛋白LC3B、抗凋亡蛋白Bcl2的表达水平。 结果：（1）VA处理浓度为0.1mg/L、0.5mg/L、2mg/L，LPS处理浓度为200μg/mL。（2）在VA处理后经LPS刺激24h的HNTEC细胞，发现随着VA浓度的增加细胞存活率升高；在48h，2mg/LVA+LPS组细胞存活率出现降低。与对照组相比，经VA处理24h和48h的HNTEC细胞，0.1mg/LVA组和0.5mg/LVA组ATP生成量、最大呼吸潜能及质子漏有升高趋势，而在2mg/LVA组，上述指标均有降低趋势。（3）与LPS组相比，在VA处理后经LPS刺激24h和48h的HNTEC细胞，VA处理组细胞线粒体膜电位降低的细胞百分比增多，且随着VA浓度的增加而升高（P＜0.05）。与对照组相比，经VA处理24h的HNTEC细胞，p62表达水平和线粒体DNA拷贝数升高且随着VA浓度的增加而增高（P＜0.05）；在48h，p62表达水平显著升高（P＜0.001），但2mg/LVA组p62表达水平较0.5mg/LVA组有所降低（P＜0.05），LC3B表达水平仅在2mg/LVA组降低（P＜0.01），线粒体DNA拷贝数在0.1mg/LVA组增加（P＜0.05）。与LPS组相比，在VA处理后给予LPS刺激24h的HNTEC细胞，PINK1表达水平在0.1mg/LVA+LPS组及0.5mg/LVA+LPS组降低（P＜0.05），线粒体DNA拷贝数在0.1mg/LVA+LPS组增加（P＜0.05）；在48h，VA处理组PINK1表达水平有降低趋势，LC3B基因和蛋白的表达都随VA浓度的增加而降低（P＜0.05），线粒体DNA拷贝数仅在0.5mg/LVA+LPS组增加（P＜0.001）。（4）与LPS组相比，在VA处理后经LPS刺激24h的HNTEC细胞，VA处理组Bcl2表达增加（P＜0.001）；在48h，Bcl2表达仅在0.1mg/LVA+LPS组有增加趋势。VA处理组细胞凋亡率降低，其中0.1mg/LVA+LPS组早凋细胞最少，0.5mg/LVA+LPS组晚凋细胞最少（P＜0.05），但在2mg/LVA+LPS组，凋亡率较其他VA浓度组增加。 结论：VA可以通过调节线粒体功能及数量影响人支气管上皮细胞代谢，在呼吸道细胞抗感染过程中发挥一定的保护作用。
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