摘要
香榧为裸子植物门，红豆杉科，榧树属的常绿针叶乔木。我们通常食用的香榧子即是它的种子。种子椭圆形或长卵圆形，外部具有肉质假种皮，假种皮具有多种功效，有研究表明香榧假种皮中含有多种抑菌及抗氧化成分。香榧假种皮所寄生的内生菌的次级代谢产物中可能也含有与假种皮具有相同作用的化学成分，且关于这方面的研究罕见报道。 为了研究香榧内生菌及其次级代谢产物的活性，以新鲜香榧假种皮、根和茎为内生菌的分离材料，从中分离内生菌，对菌株进行鉴定后，根据菌株特征以及现有文献报道选择菌株进行发酵，对次级代谢产物分离鉴定并进行活性研究，结果如下： 1.从香榧假种皮、根和茎中分离得到19株内生菌，包括假种皮10株，根4株，茎5株。其中内生真菌10株，为Alternari属、Fusarium属、Neurospora属、Trichoderma属、Chaetomium属、Trametes属、Alternari属、Colletotrichum属以及Phyllostictacapitalensis属；内生细菌9株，为Pantoea属、Bacillus属、Achromobacter属、Buttiauxella属以及Erwinia属。 2.从香榧假种皮中筛出的Trichodermacitrinoviride4ZF-01菌株经培养产生黄色物质，菌株经发酵后，乙酸乙酯萃取所得次级代谢产物具有良好的生物活性，该粗提物对金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用（MIC=3.125mg/mL），但对大肠杆菌抑菌作用效果不佳；同时，该粗提物具有较强的抗氧化的活性，能清除DPPH自由基（IC50=15.21μg/mL）和·OH（IC50=4.66mg/mL），对DPPH自由基的清除能力优于·OH。次级代谢粗提物经过硅胶柱、SephadexLH-20柱、ODS柱等多次分离得到七种化合物，经鉴定分别为：木霉菌醇（Trichomerol）（1）、Bisorbicillinolide（2）、AohironeA（3）、大黄素（Emodin）（4）、豆甾醇（Stigmasterol）（5）、麦角甾醇（Ergosterol）（6）以及大豆黄酮（Daidzein）（7），初步研究化合物抑菌活性及抗氧化活性得：化合物1和化合物2对DPPH自由基具有较强的清除能力（IC5038.92μg/mL和3.91μg/mL），化合物1、2、4和7对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性（MIC=0.78、0.39、0.20和0.20mg/mL）。 Neurosporadictyophora3ZF-02经培养后散发出明显果香，对比其不同生长时期的挥发性代谢产物的区别进行研究发现：在生长迟缓期，主要成分为酯类，伴随着一些酸类化合物和酮类化合物；在对数生长阶段，醇含量随着酮类物质含量的降低而增加，同时酸类含量达到峰值（18.43%）。其中4-萜烯醇（11.06%）可作为标记化合物；在稳定阶段，菌体含量达到最大值，酮类物质消失，醇含量显著下降，但酯含量达到峰值（41.37%）。同时，芴和茚类多环芳烃类化合物开始出现。其中1,4,5,8-Tetramethyl-naphthalene，9-Methyl-9H-fluorene、4-Methyl-9H-fluorene在其他时期未检出；衰退期时出现大量的苯和萘类化合物，并伴随着胺类物质的产生。不同时期的挥发性有机化合物均具有DPPH自由基、羟自由基、总还原能力以及白色念珠菌抑菌活性，其中培养10天时，其清除DPPH能力（IC50=1.44g/L）、清除羟基自由基能力（IC50=0.95g/L）、总还原能力和白色念珠菌抑制能力（MIC=1.56mg/mL）最强。
NETL