摘要
目的：缺血性心脏病(IHD)是由于冠状动脉阻塞或狭窄影响血液正常流动，导致心肌组织缺血缺氧，进而引发的一类心血管疾病。据世界卫生组织的统计，IHD是导致心血管疾病患者死亡的主要原因。因此，针对IHD积极地采取有效预防及干预措施，对减轻IHD患者日益加重的疾病负担尤为必要。前期研究发现，八味沉香散对异丙肾上腺素和垂体后叶素所致的大鼠心肌缺血损伤，以及大鼠冠脉结扎引起的心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用，可明显减轻线粒体损伤。心肌缺血性损伤过程中线粒体能量代谢障碍是影响心肌细胞死亡和组织损伤的重要机制，且八味沉香散可减轻心肌缺血造成的线粒体损伤。因此，本实验通过结扎左冠状动脉建立缺血性心脏病大鼠模型，研究八味沉香散对缺血性心脏病大鼠心肌酶、能量代谢相关指标、AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响及其挥发油药效物质分析，探究八味沉香散对IHD大鼠线粒体能量代谢的影响，同时测定分析八味沉香散挥发油及其入血成分，为藏药八味沉香散防治缺血性心脏病提供科学的实验依据。 方法： 1八味沉香散对缺血性心脏病大鼠血清LDH及CK-MB的影响。 通过左冠状动脉结扎法建立大鼠心肌缺血模型。以心电图S-T段及T波变化作为心肌缺血模型制备成功的指标。IHD大鼠灌胃八味沉香散后，Elisa法对大鼠血清中LDH活性及CK-MB含量进行测定。 2八味沉香散对缺血性心脏病大鼠心肌能量代谢相关代谢相关指标的影响。 ELISA法测定心肌缺血模型大鼠心肌组织中ATP、ADP、AMP含量，并计算AMP/ATP比值和能荷(EC)。紫外分光光度法和化学法测定心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、α-KGDH以及线粒体中ComplexⅠ的活性。 3.八味沉香散对缺血性心脏病大鼠心肌AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响。 Westernblot法检测各组大鼠心肌组织中AMPK、p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白的表达。 4.八味沉香散挥发油及其入血成分分析。 通过水蒸气蒸馏法提取八味沉香散挥发油，采用GC-MS技术对八味沉香散挥发油及体内入血成分进行检测。通过分析和比对给予八味沉香散挥发油后的大鼠血浆和八味沉香散挥发油提取物，初步确定血浆样品中的原型成分。 结果： 1.八味沉香散对缺血性心脏病大鼠血清LDH及CK-MB的影响。 通过分析心电图S-T段及T波变化，表明经左冠状动脉结扎法成功建立大鼠心肌缺血模型。IHD大鼠灌胃八味沉香散后血清中LDH及CK-MB活性明显降低，提示八味沉香散对IHD大鼠心肌损伤有保护作用。 2.八味沉香散对缺血性心脏病大鼠心肌能量代谢相关代谢相关指标的影响。 八味沉香散能提高IHD大鼠心肌组织中ATP、ADP浓度及EC水平，降低AMP浓度、AMP/ATP比值，增加缺血心肌组织中α-KGDH、Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP、ComplexⅠ活性。 3.八味沉香散对缺血性心脏病大鼠心肌AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响。 八味沉香散能上调缺血大鼠心肌组织中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白的表达。 4.八味沉香散挥发油挥发油及其入血成分分析。 利用GC-MS对八味沉香散挥发油及其入血成分进行分析，八味沉香散挥发油中分析出42种成分，含药血浆中分析出20种，其中挥发油入血原型成分有12种。 结论：八味沉香散可能通过上调AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路，提高高能磷酸化合物含量、增强线粒体能量代谢相关酶的活性，改善心肌缺血时心肌能量供应，从而发挥心脏保护作用。且八味沉香散挥发油20种入血成分可能是八味沉香散抗心肌缺血的药效物质基础。
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