摘要
山楝（Aphanamixispolystachya(Wall.)R.N.Parker）别名沙罗、红罗、山罗、假油桐、沙椤等，常绿乔木，高度可达15m，宽可达1.5-1.8m，属于楝科山楝属植物，叶为奇数且为羽状复叶，长有30cm，宽约5cm，果实近卵形，成熟后显橙黄色，开裂为3果瓣，种子有假种皮。全世界大约有山楝属植物25种，主要分布于中南半岛、孟加拉，中国云南广东广西等南亚和东南亚的热带和亚热带地区[1]。山楝在孟加拉国内用于治疗肿瘤、癌症、脾脏疾病以及风湿病；在中国云南等地区也被用来舒筋活络、缓解类风湿性关节疼痛、风寒痹痛和四肢麻木等疾病，此外这种植物的种子辛辣、清凉、通便、驱虫和治疗溃疡等疾病，果实也可用于肥料[3-6]。据文献报道，山楝中主要含有倍半萜、二萜、三萜等萜类成分和甾体等[7]。 目的：本论文为了进一步研究山楝的次生代谢产物，以山楝叶为研究对象，对其进行系统的提取分离研究，利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱色谱、反相柱色谱、制备型液相色谱进行分离纯化、利用薄层色谱，分析型高效液相色谱分析，质谱分析，建立成熟的系统化分析鉴定方法，对其化合物进行更加有效的提取分离研究，对其得到的单体化合物应用紫外分析仪（UV）、质谱仪（MS）、以及核磁共振仪（1H-NMR、13C-NMR、HMBC、1H-1HCOSY、HSQC、NOESY）等解析化合物的结构，并筛选其生物活性，丰富山楝植物的化合物库，为山楝植物的进一步开发和研究提供科学依据。 方法：取干燥粉碎的山楝叶约5kg，用95%工业乙醇冷浸提取三次，合并后过滤，于旋转蒸发仪中减压浓缩至膏状，得到浸膏800g，将浸膏均匀悬浮于水中，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液浓缩后得石油醚部分浸膏123g，二氯甲烷部分浸膏300g、乙酸乙酯部分浸膏30g，正丁醇部分浸膏207g。对二氯甲烷部分浸膏采用硅胶柱层析、薄层色谱、凝胶柱层析、制备高效液相色谱和半制备液相色谱法对其化学成分进行分离纯化，得到的单体化合物采用UV,TLC,HPLC,1H-NMR,13C-NMR,1H-1HCOSY,HMBC,HSQC,MS,NOESY等波谱技术进行纯度和结构鉴定，对单体化合物测定肿瘤抑制活性以及对正常细胞的毒性。 结果：通过对山楝叶二氯甲烷部分的系统分离，共得到11个化合物（3个新化合物，8个已知化合物），其中包括海绵素类化合物、莨菪亭类化合物、倍半萜类化合物，分别为6-(7-(5,5-dimethyl-4-oxo-4,5-dihydrofuran-2-yl)oct-1-en-2-yl)-4-methyl-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one(1),4-methyl-6-(2-oxopropyl)-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one(2),NemoralisinA(3),4-methyl-6-(7-oxooct-1-en-2-yl)-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one(4),4-Hydroxybenzaldehyde(5),Scopoletin(6),NemoralisinD(7),nornemoralisinA(8),NemoralisinJ(9),1-(4-Hydroxyphenyl)methanediol(10),β-Sitosterol(11)。其中化合物1、2、4为新化合物，化合物6为首次从楝科分离得到，化合物7、8、9为首次从山楝分离得到。 对本课题组前期得到的山楝小枝中的14个化合物进行了体外抗肿瘤实验，分别为：CinnacassideF,9-β-Xylopyranosyl-(-)-isolariciresinol,(-)-Secoisolariciresinol-9-O-β-D-xylopyranoside,Schizandriside,[(1S,2R,3R)-1,2,3,4-tetrahydro-7-hydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-6-methoxy-2-naphthalenyl]methyl-β-D-Glucopyranoside,[(1R,2S,3S)-1,2,3,4-tetrahydro-7-hydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-6-methoxy-2-naphthalenyl]methyl-β-D-Glucopyranoside,10-HydroxyaloinB,10-HydroxyaloinA,Puerarin,6-(D-Glucopyranosyloxy)-7-hydroxy-2H-1-benzopyran-2-one,Luteolin,Diosmetin,Myricetin,3-[4-(D-Glucopyranosyloxy)phenyl]-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one,结果表明：在10umol/L浓度下，化合物CinnacassideF对人脑星形胶质母细胞的抑制率为93.5%；化合物9-β-Xylopyranosyl-(-)-isolariciresinol对人子宫颈癌细胞的抑制率为48.9%；化合物Schizandriside对人子宫颈癌细胞的抑制率为49.1%；化合物[(1S,2R,3R)-1,2,3,4-tetrahydro-7-hydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-6-methoxy-2-naphthalenyl]methyl-β-D-Glucopyranoside对人子宫颈癌细胞的抑制率为43.9%，对人脑胶质瘤细胞的抑制率为42.7%；化合物[(1R,2S,3S)-1,2,3,4-tetrahydro-7-hydroxy-1-(4-hydroxyl-3,5-dimethoxy-phenyl)-3-(hydroxymethyl)-6-methoxy-2-naphthalenyl]methyl-β-D-Glucopyranoside对人子宫颈癌细胞的抑制率为59.9%；化合物10-hydroxyaloinB对人子宫颈癌细胞的抑制率为54.6%；化合物Luteolin对人子宫颈癌细胞、小鼠皮肤成纤维细胞、人脑星形胶质母细胞瘤、小鼠海马神经元瘤细胞、小鼠脑胶质瘤细胞的抑制率分别为62.2%、91.1%、78.3%、65.2%、67.7%；化合物Diosmetin对小鼠皮肤成纤维细胞、小鼠海马神经元瘤细胞的抑制率分别为69.8%、61.9%；化合物3-[4-(D-Glucopyranosyloxy)phenyl]-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one对人子宫颈癌细胞、小鼠皮肤成纤维细胞的抑制率为57.0%、62.4%。 结论：本课题通过使用各种分离手段，对山楝叶进行了系统分离，共鉴定11个化合物的结构。其中包括海绵素类化合物、莨菪亭类化合物、倍半萜类化合物。CinnacassideF对人脑星形胶质母细胞的抑制率为93.5%，化合物Luteolin对小鼠皮肤成纤维细胞、人脑星形胶质母细胞瘤的抑制率分别为91.1%、78.3%，有高抗肿瘤活性和细胞毒性，具有进一步研究价值。
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