摘要
三色堇（Violatricolor）是堇菜科堇菜属花卉，是一类再生顽拗型植物，难以通过建立再生体系进行遗传转化开展分子研究或基因改良。本课题通过直接导入法将6个外源基因（5个矮牵牛育性相关基因、1个拟南芥再生相关基因）分别导入三色堇，拟建立三色堇的遗传转化体系，并获得新种质。主要研究结果如下： 1、花粉管通道法转化三色堇：三色堇21号盛花期，通过切割柱头滴加质粒溶液的方法将PhAAC2、PhABCG26、PhDof16、PhMYC2、PhRL超表载体转化三色堇。统计结果表明：不同的基因载体之间单株结果量没有差异；PhDof16的单果结种量较其他载体显著增加，其他基因载体之间没有显著差异；不同基因载体之间百粒重差异显著。PCR检测表明，转化PhRL获得阳性植株5株，阳性率达到4.24%。 2、农杆菌浸种法转化三色堇：通过农杆菌浸种将PhABCG26、PhMYC2、PhRL转化三色堇，获得转化PhABCG26的阳性植株6株，阳性率达到4.76%. 3、阳性植株表型观测：与野生型相比，转化株系PhRL-2和PhRL-3的单朵花粉量明显增加，花粉萌发率明显下降；转化株系PhABCG26-1的花朵显著变小、单朵花粉量明显增多，转基因株系PhABCG26-3的单朵花粉量无显著差异、花粉萌发率明显下降。 4、三色堇转AtWUS阳性株系的T2代表型观测：播种农杆菌浸种法转化株系T2代（GSS）和花粉管通道法转化株系T2代（PTP），共获得20株幼苗，其中4株在幼苗期死亡。在幼苗期，株系GSS-1、GSS-4和PTP-1均出现部分叶片皱缩、缺刻，轻微被白粉；株系PTP-4和PTP-5在苗期2片真叶后顶芽缺失，后PTP-5死亡。成苗期进行PCR检测没有获得阳性后代。
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