摘要
顺铂是临床使用最广泛的化疗药物之一,但是严重的毒副作用和耐药导致其治疗效果不佳.为了降低顺铂化疗的毒副作用,提高治疗效果,本课题将iRGD肽修饰在光激活脂质体(lipo)上,将其负载配位键连接的Pt(Ⅳ)前药和Ru(Ⅱ)基光敏剂Ru-Pt-Ru,制备成具有iRGD修饰的载药光激活脂质体(Ru-Pt-Ru@iRGD-lipo),将化疗与光动力治疗(PDT)联合用于乳腺癌治疗.该脂质体载药体系联用Pt、Ru双金属,以实现化疗与PDT协同增强治疗肿瘤的效果.首先,在激光照射下,脂质体中的不饱和磷脂可被活性氧(ROS)氧化,释放出药物.在激光照射下光敏剂产生1O2发挥光动力治疗.其次,Pt(Ⅳ)前药可被肿瘤细胞中的谷胱甘肽(GSH)还原成Pt(Ⅱ),发挥化疗效果.而Pt(Ⅱ)具有类酶功能,可以激活电子传递生成O2??,形成被超氧化物歧化酶(SOD)激活的H2O2,这可以打破肿瘤中ROS和GSH的氧化还原平衡,解决PDT中的ROS淬灭问题,缓解缺氧.同时,在激光照射下,Ru(Ⅱ)基光敏剂生成的大量ROS可以促进M1型巨噬细胞(M1-TAMs)的产生和M2型巨噬细胞(M2-TAMs)极化成M1-TAMs,减轻免疫抑制,增强抗肿瘤作用. 本课题首先在Pt(Ⅳ)轴向配体两端通过配位键各修饰上一个Ru(Ⅱ)基光敏剂,制备成Ru-Pt-Ru药物,通过核磁共振氢谱、质谱、紫外-可见分光光度法等进行结构验证,通过荧光分光光度法等对其光学性能进行表征.然后通过薄膜分散法制备载药脂质体,利用DLS、TEM、紫外-可见分光光度法等对其理化性质进行表征.通过荧光成像、流式细胞术考察4T1细胞对脂质体的摄取情况,通过MTT实验检测其细胞毒性;通过DCFH-DA探针检测其ROS的生成;通过GSH检测试剂盒检测胞内GSH水平;通过凋亡试剂盒检测其诱导细胞凋亡情况;通过周期试剂盒检测其对细胞周期的影响.最后考察其体内抗乳腺癌效果及对肿瘤相关巨噬细胞的影响. 经配方优化,我们成功制备了具有iRGD靶向的载药光激活脂质体(Ru-Pt-Ru@iRGD-lipo),其平均粒径为134.1±4.5nm,PDI为0.273±0.015,Ru-Pt-Ru@iRGD-lipo呈均匀的球形,药剂学性能良好.体外细胞实验证明Ru-Pt-Ru@iRGD-lipo脂质体对正常细胞毒副作用小,但在激光照射条件下能产生大量ROS,诱导肿瘤细胞凋亡.Ru-Pt-Ru@iRGD-lipo能显著降低胞内的GSH,打破ROS和GSH的化学平衡,缓解缺氧.体内动物实验证明Ru-Pt-Ru@iRGD-lipo在激光照射条件下能显著抑制体内肿瘤的生长,而对正常组织器官损伤小,能够降低M2-TAMs种群数量,增加M1-TAMs种群数量,增强免疫活性,达到协同抗肿瘤效果. 综上所述,本课题成功制备了iRGD肽修饰的包载Ru-Pt-Ru药物的脂质体靶向递药系统Ru-Pt-Ru@iRGD-lipo,其粒径均匀、稳定性好、生物相容性良好,在体内外具有优异的抗肿瘤作用,在靶向治疗乳腺癌方面显示出巨大的潜力.
NETL