摘要
黑老虎(Kadsuracoccinea)是五味子科(Schisandraceae)南五味子属(Kadsura)常绿木质藤本野生植物。近年来，由于其多样的生物活性，黑老虎备受关注。然而,目前对黑老虎的研究主要集中在不同品种间果实的生物活性以及相关木脂素的探索上。关于黑老虎其他部位中的多酚物质，尚缺乏系统性的研究。因此，本课题的主要是以黑老虎的根、茎和叶作为研究对象，通过采用不同的提取方法，提取三个品种的三个部位中的多酚物质，并探讨在不同提取方法下所测得的多酚含量，以及不同品种和部位之间的多酚含量差异。研究发现超声提取操作步骤简单、提取花费时间短，拥有较好的提取效率。各品种、部位间多酚含量呈以下趋势:紫黑＞粉红＞大红，根部＞茎部＞叶部，热回流法所提的紫黑根部多酚提取物含量最高，为40.40mgGAE/g。同时对用于多酚纯化的大孔树脂也进行了筛选，结果表明AB-8对黑老虎多酚提取物具有良好的吸附与解吸效果。黑老虎品种紫黑根部纯化后多酚浓度为126.94±0.17μgGAE/g,浓度提高了40.19％;紫黑茎部纯化后多酚浓度为58.53±0.13μgGAE/g,浓度提高了37.93％;紫黑叶部纯化后多酚浓度为29.00±0.22μgGAE/g,浓度提高了42.03％;纯化后的多酚纯度均得到了一定提高。最后，考察了黑老虎多酚提取物的自由基清除能力，结果表明在高浓度下(1mg/mL),黑老虎各品种、各部位的多酚提取物对DPPH自由基清除率达到85％以上，对ABTS·+自由基清除率达90％以上。 采用细胞实验验证黑老虎紫黑品种不同部位多酚提取物的抗炎效果，建立RAW246.7小鼠炎症模型，考察药物组与模型组间细胞释放的NO含量，细胞内部ROS含量的差异，并通过WB实验与E-LISA实验，在蛋白表达方面以及炎症因子释放方面比较药物组与LPS对照组间差异，探讨黑老虎紫黑品种多酚提取物对于炎症模型的抑制作用。结果表明浓度在6.25-100μg/mL时，黑老虎多酚提取物对RAW264.7细胞无毒性，细胞存活率保持在90％以上。药物组较LPS对照组，其NO释放量均有明显降低。其中多酚提取物浓度在50-100μg/mL时，根部药物组NO的释放量明显低于同浓度下的茎与叶部药物组。当黑老虎根部位多酚提取物浓度为100μg/mL时,LPS对照组所释放NO的含量约为其的2.23倍(P＜0.001)。药物组细胞内ROS含量也呈现下调趋势，根部实验组药物浓度在50μg/mL和100μg/mL时，细胞内ROS水平较LPS对照组分别下调74.10％和98.95％。与LPS对照组相比，各药物组的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12蛋白表达量均显著降低，且炎症因子释放量也呈现下调趋势。 以超高效液相色谱串联质谱作为检测方法，对根、茎、叶三个部位的多酚代谢物进行定性与定量，在黑老虎根、茎、叶中共鉴定出949种代谢物，可分为酚酸、木脂素、黄酮醇、花青素、豆香素等14类代谢物。在三个部位代谢物中均占据主导地位的是酚酸、木脂素、黄酮以及黄酮醇这四类代谢物，分别为410种、149种、120种与101种。通过OPLS-DA模型筛选差异代谢物，各部位的代谢物差异主要集中在酚酸、木脂素与黄酮三类代谢物中，而茋类与鞣质的生物含量差异较小。进一步筛选得到249种三组间共有的差异代谢物。在黑老虎根部位的共有差异代谢物中，酚酸类代谢物主要呈现下调趋势，而木脂素类代谢物则主要呈上调趋势，这与茎、叶两部位的代谢物积累情况呈相反趋势。同时，对差异代谢途径进行了KEGG代谢通路分析。发现各部位间差异代谢物主要富集在次级代谢物的生物合成、类黄酮生物合成和类苯丙酸生物合成代谢通路上。对苯丙氨酸代谢通路中的富集代谢物进行研究，发现用于合成木脂素的酚酸类前体代谢物在茎部位拥有明显的积累情况，相较与根与叶部呈现明显上调趋势，可能是在该通路中，根与茎部位中更多酚酸类前体代谢物被用于合成了木脂素。
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