摘要
随着全球人口压力越来越大，控制人口数量已成为当务之急，但目前男性避孕手段存在危险性高，可逆性差等问题，因此开展男性避孕疫苗的研究具有重要意义。已有研究表明促黄体生成素受体（LHR）对哺乳动物生殖力调节起重要作用。在雄性动物体内，促黄体生成素（LH）结合睾丸间质细胞（Leydig），通过Leydig细胞表面的LHR介导环磷酸腺苷/蛋白质激酶A（cAMP/PKA）途径调控雄激素的生成。实验证明特殊位点的LHR蛋白片段免疫雄兔能阻断LH与LHR的结合，导致雄激素的分泌减少，可作为调控男性生殖能力的手段，但目前尚未报道有效可调控男性生殖能力的LHR片段，因此LHR的免疫原性研究有助于男性生殖能力调节的研究及避孕疫苗的开发。 本试验从LHR的蛋白结构与功能入手，利用DNASTAR软件预测LHR膜外富含亮氨酸重复区域（LRR）蛋白的亲水性和抗原性，在LRR2的β折叠区筛选到一段高亲水性高抗原性多肽片段，序列为：VKIEISQSDSLERC，合成多肽与抗原载体钥孔血蓝蛋白（KLH）耦联，分别混合弗氏完全佐剂（CFA）和赛比克不完全佐剂206（ISA206），免疫小鼠。结果显示：两种佐剂下LHR多肽均能产生持久高滴度抗体，免疫八周后试验组血清睾酮含量仍显著低于对照组，并且试验组曲细精管腔内各级生精细胞数目减少，这表明成功筛选到有免疫效应的LHR多肽片段。同时比较CFA和ISA206的抗原呈递效应，结果显示：CFA抗原呈递时间长于ISA206，ISA206抗体水平高于CFA。由于CFA刺激性过强，导致睾丸被脂肪包裹，脾脏肿大和肝脏脂肪变性等病变，ISA206并不引起明显的病理变化。为降低抗原合成成本，用原核表达载体pET28a表达LHR膜外区LRR1-7蛋白，该蛋白包含已经试验验证有效的多肽片段，成功获得的蛋白混合ISA206进行小鼠免疫试验，结果显示：膜外区LRR1-7蛋白能产生高滴度抗体，且实验组血清睾酮含量、附睾精子数量和精子活力都有显著降低，这表明克隆获得的LHR膜外区蛋白有较强的免疫效应。本试验成功找到有免疫效应的LHR多肽和LHR膜外区蛋白片段，并证明ISA206比CFA抗原呈递效果更好且无病理反应，为开发可逆调控男性生殖力的避孕方法提供思路和理论依据。
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