摘要
为了给广谱鸡球虫病早熟弱毒活疫苗提供和缓艾美耳球虫（E. mitis）疫苗虫株和科学可靠的理论依据。本试验通过单卵囊分离纯化技术、早熟诱导技术获得E. mitis山西亲本株和早熟株，通过感染鸡测定E. mitis亲本株和早熟株的潜隐期、寄生部位、致病性、繁殖力、免疫原性及卵囊形态特点和最短孢子化时间，结合PCR技术和免疫攻毒试验确定E. mitis虫株及其生物学特性和免疫原性。研究结果发现： （1）单卵囊分离纯化与鉴定 在山西太谷某鸡场分离获得混合球虫株，经单卵囊分离纯化获得1株潜隐期为97h的球虫株。对单卵囊分离获得的球虫卵囊经生物学特性及分子生物学鉴定，结果发现：①卵囊大小为：13.11μm-17.66μm×11.90μm-16.71μm，平均为15.25μm×14.21μm，形态指数1.07；感染剂量≤20×104孢子化卵囊/只的鸡不死亡，但增重减缓，虫体主要寄生于回肠和盲肠颈部，寄生部位未见眼观病变，但可引起肠绒毛顶部断裂；最短孢子化时间为15h。②PCR检测单卵囊后代PCR产物出现和缓艾美耳球虫特异性条带（330bp），而柔嫩艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫四重PCR产物均未出现条带（454、294、137、230bp）。 （2）早熟诱导试验 对鉴定后的E. mitis亲本株进行10代早熟诱导传代，获得一株潜隐期为90h，平均大小为15.20μm×14.25μm，形态指数1.07的E. mitis山西早熟株球虫。 （3）E. mitis山西早熟株与亲本株生物学特性 ①早熟株潜隐期较亲本株大幅缩短7h；②攻毒剂量2×105个卵囊/只时，早熟株攻毒组鸡平均增重显著高于亲本株（P＜0.05），早熟株组鸡相对增重率（85%）高于亲本株攻毒组鸡（55%）；早熟株攻毒鸡的回肠、盲肠绒毛基本完整，而亲本株攻毒鸡肠绒毛损伤严重。③早熟株的繁殖能力为亲本株的67.4%-71.9%。 （4）E. mitis山西早熟株免疫原性 E. mitis山西早熟株免疫剂量≥100个/每只时，免疫攻毒鸡的相对增重率（86.87）≥85%、卵囊减少率（91.4）≥75%，可以获得良好免疫效果。 上述结果表明：本试验通过单卵囊纯化技术获得了一株纯种和缓艾美耳球虫卵囊，并通过早熟诱导技术得到一株致病性明显降低且保留了良好免疫原性的和缓艾美耳球虫早熟株。
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