摘要
目的： 通过检测大疱性类天疱疮（Bullous pemphigoid，BP）患者皮损处热休克蛋白90(heat shock proteins 90, HSP90)以及糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)的表达水平和分布情况，探讨大疱性类天疱疮患者皮损处HSP90和GR的表达及亚细胞定位与糖皮质激素抵抗（gluco corticoid resistance, GCR）的相关性。 方法： 1．收集2009年1月至2022年12月于河北医科大学第四医院皮肤科留存的大疱性类天疱疮患者皮肤组织蜡块，回顾既往病例分为糖皮质激素抵抗组和糖皮质激素敏感组（glucocorticoid sensitive, GCS）。并选取同时期我院皮肤科病理结果为皮内痣的组织蜡块作为对照组（Ct），每组均为12例。 2．采用流式细胞术检测各组HSP90和GR的表达水平；应用激光共聚焦显微镜观察真皮处HSP90和GR的核内外分布情况；通过免疫组织化学技术观察HSP90在表皮处的表达和亚细胞定位。使用SPSS 21.0版软件对临床获取的资料以及实验所得数据进行统计学分析，多样本均数比较若满足正态性分布和方差齐性用方差分析，若不满足正态性分布用Krus kal-Wallis H检验，两样本均数比较用t检验，两样本率的比较用卡方检验。 结果： 1 临床资料 一般情况：GCR组年龄范围32~92岁，均值为（64.25±14.67）岁。GCS组年龄范围54~88岁，均值为（73.17±11.41）岁。Ct组年龄范围38~65岁，均值为（54.42±7.90）岁。GCR组与GCS组在年龄上无统计学差异（P＞0.05）。 2 实验结果 2.1 流式细胞术检测组织样本中HSP90和GR的表达水平 1）GCR组HSP90的表达百分比最低为6.10，最高为48.37，均值±标准差：27.69 ±14.60；GCS组HSP90的表达百分比最低为2.75 ，最高为21.1 8，均值±标准差：10.26±5.25；Ct组HSP90的表达百分比最低为2.53，最高为11.91，均值±标准差：6.43±2.81。GCR组与GCS组两组间HSP90的表达具有显著差异（P＜0.001）。 2) GCR组GR的表达百分比最低为1.59，最高为16.67，均值±标准差：6.22±5.34；GCS组GR的表达百分比最低为5.23，最高为34.61，均值±标准差：14.93±8.56；Ct组GR的表达百分比最低为1.02，最高为12 .52，均值±标准差：4.67±3.38。GCR组与GCS组两组间GR的表达具有显著差异（P＜0.05）。 2.2 激光共聚焦显微镜技术观察组织样本真皮处HSP90和GR的核内外分布情况 1）根据细胞核内外荧光强度评分（0~4分），0分为细胞核内荧光强度明显弱于细胞浆，4分为细胞核内荧光强度明显强于细胞浆。按细胞核荧光强度大于等于细胞浆中的荧光强度（评分≥2分）和细胞核中荧光强度小于细胞浆（评分＜2分）分为两组。 2）GCR组评分≥2分的细胞计数总分为357分，评分＜2分的细胞计数总分为446分；GCS组评分≥2分的细胞计数总分为102分，评分＜2分的细胞计数总分为735分。即GCR组HSP90倾向分布于核内，GCS组HSP90倾向分布于胞浆内，其两组间差异具有统计学意义（P＜0.001）。 2.3 免疫组织化学技术观察HSP90在表皮处的表达和亚细胞定位 1）GCR组平均光密度值（AOD，IOD/阳性面积）最小为0.257，最大为0.471，均值±标准差：0.345±0.066；GCS组AOD值最小为0.268，最大为0.435，均值±标准差：0.330±0.065。两组间HSP90的表达强度无明显差异（P＞0.05）。 2）表皮处HSP90在GCR组和GCS组均主要分布于细胞浆中。 结论： 1. 糖皮质激素抵抗型大疱性类天疱疮患者皮损处HSP90的表达水平相较于糖皮质激素敏感型患者更高，而GR的表达水平则较敏感型患者要低。 2. 在大疱性类天疱疮激素抵抗型患者皮损真皮处HSP90和GR均更倾向于在细胞核内分布，而在激素敏感型患者中，HSP90和GR多在细胞浆中分布；在表皮处，激素抵抗型和激素敏感型患者HSP90的表达强度无明显差异，且定位均主要在细胞浆中。 3. 皮损处的HSP90过表达以及真皮处HSP90的核内分布与大疱性类天疱疮糖皮质激素抵抗具有一定的相关性。
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