摘要
青鱼为我国“四大家鱼”之一，是重要的淡水经济鱼类。其养殖环境复杂，环境中的病毒等对青鱼养殖造成了严重危害，然而国内外有关青鱼免疫学方面的研究不多。所以，系统探究青鱼抗病毒天然免疫机制为青鱼养殖业未来的发展奠定了基础。 二羟基丙酮激酶 (Dihydroxyacetone kinases，DAK)是一种重要的蛋白激酶，哺乳动物中的研究表明DAK可以与MDA5相互作用，负调控MDA5介导的干扰素信号通路，然而有关其在鱼类抗病毒先天免疫反应中的功能尚不清晰。在工作组已经鉴定青鱼MDA5基因在RLR信号通路中起着关键功能的基础上，本研究对青鱼DAK基因进行了表征，并鉴定了DAK与MDA5之间的相互作用方式，解析了DAK在青鱼抗病毒先天免疫反应中的功能，为系统阐明青鱼天然免疫系统提供重要数据。 本研究通过分子克隆，获得了青鱼DAK CDS区序列，与哺乳动物DAK相比，青鱼DAK在序列和结构上较为保守。荧光定量PCR实验表明青鱼DAK在由细菌或病毒刺激细胞时激活的宿主天然免疫反应中发挥了作用。免疫印迹实验和免疫荧光实验结果表明青鱼DAK在细胞中表达的蛋白迁移大小约为60kDa，且定位于胞质。双荧光实验表明当单独表达青鱼DAK时，其基本不具有干扰素调节能力，而与青鱼MDA5共表达时，其明显抑制了青鱼MDA5介导的IFNamp;nbsp;启动子活性。噬斑实验表明，青鱼DAK抑制青鱼MDA5对鲤春病毒血症病毒（spring viremia of carp virus, SVCV）的抗病毒活性。与之相反，敲降青鱼DAK可以激活宿主细胞抗病毒活性。青鱼DAK和青鱼MDA5之间的关联已通过免疫荧光染色和免疫共沉淀分析进行了鉴定，当二者与MAVS共表达时，青鱼DAK减弱了青鱼MDA5与青鱼MAVS的结合。 因此，本研究的数据支持以下结论：青鱼DAK通过与青鱼MDA5相互作用，且影响其与下游青鱼MAVS的结合抑制青鱼MDA5介导的抗病毒信号通路。总的来说，本论文研究结果表明青鱼DAK在青鱼的抗病毒先天免疫中起着重要作用，而且青鱼DAK在青鱼MDA5介导的信号传递中起到了负调节作用，本论文为将来深入研究青鱼DAK基因在青鱼先天免疫中的作用机制奠定了基础。
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