摘要
目的： 研究白头翁皂苷B4（Anemoside B4，AB4）对于高尿酸血症（hyperuricemia,HUA）的药效作用，并对其降尿酸机制作初步探索，同时考察大鼠体内AB4经不同给药途径的药代动力学差异，为其后期成药研究提供前期研究基础。 方法： 1.通过腹腔注射浓度为450mg/kg的氧嗪酸钾，构建急性ICR小鼠高尿酸血症模型，预先给药AB4一周，初步考察AB4对于高尿酸血症的预防作用。 2.采用高尿酸特殊饲料喂养构建KKAy小鼠高尿酸血症模型，在造模的同时给药，进一步考察AB4对于高尿酸血症的药效作用。 3.通过体外底物-酶孵育实验，采用酶标仪测定AB4对于黄嘌呤氧化酶的抑制作用。 4.基于嘌呤代谢途径和高效液相色谱串联质谱（high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）技术，建立了测定小鼠肝脏中尿酸及其前体含量的靶向代谢组学分析方法，检测AB4对KKAy小鼠肝脏中尿酸及其前体的含量的影响。 5.使用实时荧光定量PCR（Polymerase chain reaction，PCR）检测两种高尿酸血症模型小鼠肝肾组织中尿酸转运体OAT1、OAT3、BCRP、URAT1、GLUT9和NPT1的基因表达水平。 6.采用实验室前期建立并经过方法学验证的HPLC-MS/MS方法，考察大鼠经灌胃AB4溶液、肠溶胶囊、直肠给予AB4栓剂以及尾静脉注射AB4溶液后的药代动力学差异。 结果： 1.在ICR小鼠急性高尿酸血症模型中模型组小鼠的血清（Uric acid，UA）尿酸水平显著高于空白组小鼠，高尿酸血症小鼠模型构建成功。预先给药AB4可以有效降低ICR小鼠急性高尿酸血症模型中小鼠血尿酸水平。 2.在KKAy小鼠高尿酸血症模型中模型组小鼠的血清尿酸、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）和甘油三酯水平（Triglycerid，TG）显著高于空白组小鼠，高尿酸血症小鼠模型构建成功。AB4可以有效降低KKAy小鼠高尿酸血症模型中小鼠血尿酸和尿素氮水平。 3.AB4可在体外一定程度抑制黄嘌呤氧化酶的活性。 4.AB4可以降低KKAy小鼠肝脏中尿酸前体的含量从而影响肝脏中尿酸的生成，使尿酸降低。 5.AB4上调ICR小鼠急性高尿酸血症模型小鼠肾脏组织中OAT3mRNA、BCRP mRNA和NPT1mRNA水平，上调肝脏组织中BCRP mRNA水平，下调肾脏组织URAT1mRNA表达水平，从而影响尿酸代谢，起到降尿酸的作用。 6.AB4可以上调KKAy小鼠高尿酸血症模型中小鼠肾脏组织OAT1mRNA、OAT3mRNA、BCRP mRNA和NPT1mRNA水平，上调肝脏组织中BCRP mRNA水平，进而影响尿酸代谢，达到降尿酸的目的。 7.对比灌胃AB4溶液、肠溶胶囊和直肠栓剂三种不同剂型的药代动力学参数，发现在同等剂量下，直肠给药AB4栓剂与其他两种口服剂型相比，在大鼠血浆中的暴露量是口服AB4溶液和肠溶胶囊的49倍和28倍。 结论： 1.AB4能显著降低高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸水平。一方面，AB4抑制黄嘌呤氧化酶的活性，同时抑制尿酸前体的生成，进而减少尿酸生成。另一方面，AB4调控尿酸转运体OAT1、OAT3、BCRP、NPTI、URAT1等基因的表达水平影响尿酸的转运和排泄。 2.AB4口服后生物利用度极低，AB4直肠栓剂和肠溶胶囊可以一定程度提高其在体内的暴露量，但直肠栓剂提升的效果最为显著，可作为一个潜在的提高AB4在体内生物利用度和暴露量的剂型。
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