摘要
志贺菌（又称痢疾杆菌）是一种重要的人畜共患病原。随着我国牛羊养殖业的快速发展，牛羊腹泻在养殖场普遍存在，发生原因复杂。引起牛和羊细菌性腹泻的病原菌种类多，如产肠毒素大肠杆菌和沙门氏菌等。此外，由于抗菌药物长期被滥用，导致大量志贺菌耐药菌株产生，严重制约该病的有效防控。牛、羊养殖是新疆塔额垦区的重要产业之一，目前新疆塔额垦区牛源、羊源志贺菌的耐药性和致病性调查尚缺乏相关数据。因此开展相关研究可为新疆塔额垦区牛、羊源志贺菌的防控提供参考。 本研究于2022年3-4月份从新疆塔额垦区不同地区采集牛、羊腹泻粪便 335 份，采用 SS琼脂鉴别培养基，进行牛、羊源志贺菌分离培养，通过形态学和 16S rDNA 通用引物进行PCR扩增、测序，共鉴定32 株志贺菌。采用 K-B 纸片法对分离菌进行药物敏感性试验，结果显示 32 株牛、羊源志贺菌对 13种抗菌药物的耐药率介于9.38%-87.5%之间，对四环素（28/32，87.5%）、多西环素（28/32，87.5%）、氨苄西林（27/32，84.38%）耐药率较高，对复方新诺明（19/32，59.37%）、头孢噻吩（18/32，56.25%）、庆大霉素（18/32，56.25%）、链霉素（17/32，53.13%）、头孢噻呋（16/32， 50%）等药物表现不同程度耐药。 采用96孔结晶紫微量板法对32株分离菌生物被膜形成能力进行检测，结果表明共筛选出 2 株生物被膜阳性株，无成膜能力志贺菌共30株，中等成膜能力的有 1 株，成膜能力强的仅 1 株，由此可以看出，本试验中大多细菌无生物被膜形成能力。对 32 株志贺菌的耐药基因携带情况检测结果表明，共检测到tetA、tetM、gyrA、gyrB、parC、blaTEM、blaCXT-MU、cmla、oqxA、oqxB等 14 种耐药基因，其中四环素类检测出tetA和tetM，检出率分别为84.38%（27/32）和71.88%（23/32）；喹诺酮类检测出gyrA、gyrB和parC，检出率分别为100%（32/32）、96.88%（31/32）和100%（32/32）；β-内酰胺类检测出blaTEM和blaCXT-MU，检出率分别为96.88%（31/32）和68.75%（22/32）；氯霉素类检测出cmla，检出率为46.88%（15/32）；外排泵检测出oqxA和oqxB，检出率分别为28.13%（9/32）、3.13%（1/32）；磺胺类检测出sul1和sul2，检出率分别为43.75%（14/32）和18.75%（6/32）；氨基糖苷类检测出aph和ant，检出率分别为90.63%（29/32）和31.25%（10/32）。 对18种毒力基因进行检测，sodA、mat的检出率为100%（32/32）；sheA的检出率为96.88%（31/32）；yijp的检测出为93.75%（30/32）；ibeB的检测率为90.63%（29/32）；ipaBCD的检出率为78.13%（25/32）；icsA检出率为62.5%（20/32）；ial的检出率为50%（16/32）；sen、iucD的检出率为46.88%（15/32）；stx1的检出率为12.5%（4/32）；bor的检出率为6.25%（2/32）；estA、stx2的检出率为3.13%（1/32）。 对分离株进行小鼠致病性试验，结果显示分离菌株都显示致病性，剖检可见肝脏、肾脏、肺脏和脾脏均有不同程度的病变。 本试验选取19种D-氨基酸，共筛选出2种D-氨基酸（D-苯丙氨酸、D-缬氨酸）对志贺菌（273-1）的生物被膜有抑制作用；采用棋盘法将D-苯丙氨酸与阿米卡星、多西环素联合作用于志贺菌（273-1），结果表明，D-苯丙氨酸与阿米卡星联用时最小抑菌浓度从256μg/mL降低到64μg/mL，与多四环素联用时最小抑菌浓度从256μg/mL降低到16μg/mL。结果显示D-苯丙氨酸与阿米卡星、多西环素联合使用，具有协同增效作用。 通过对新疆塔额垦区牛羊源志贺菌进行分子流行病学调查，特别是分析其耐药和毒力基因分布情况，为新疆塔额垦区牛、羊源志贺菌的防治提供依据。
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