摘要
背景： Waardenburg综合征 (Waardenburg syndrome, WS) 又称听力-色素异常综合征，是一种罕见的遗传性耳聋，以感音神经性聋、虹膜异色、额前白发或早白发为主要临床表现，其主要遗传方式为常染色体显性遗传伴不完全外显，具有高度的临床和基因异质性，使得临床诊断较为困难，对WS患者及家系进行遗传学分析，进一步明确其分子遗传学病因则具有重要意义。对于重度或极重度感音神经性聋，人工耳蜗植入 (Cochlear Implantation, CI) 是有效的重要治疗手段，但目前关于WS患儿人工耳蜗植入术后听觉言语康复效果及康复时间规律的研究较少。 目的： 通过基因检测技术对收集的6例WS患儿及家系进行遗传学分析，明确患儿的致病基因及变异位点，以图发现新的致病性变异位点，丰富WS的基因突变谱。比较WS患儿与非综合征型耳聋患儿人工耳蜗植入术后听觉言语康复效果及康复时间规律，为WS患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复提供依据。 方法： 1、收集6例在2019-2021年就诊于我科临床诊断为WS患儿及家系成员的临床资料，采集外周静脉血，提取基因组DNA，采用全外显子组测序 (Whole Exome Sequencing, WES) 技术筛选6例WS患儿的致病基因及可疑变异位点，依照美国医学遗传学和基因组学学会 (American College of Medical Genetics and Genomics, ACMG) 指南对变异位点进行解读，采用 Sanger 测序验证家系成员的点突变，采用实时定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction, Q-PCR) 验证拷贝数变异。 2、收集2012-2021年就诊于我科行人工耳蜗植入术的语前聋患儿40例，其中实验组 (WS组) 20例，对照组20例，评估两组患儿人工耳蜗植入术后的听觉行为 (Categories of Auditory Performance, CAP) 和言语可懂度 (Speech Intelligibility Rating, SIR)。采用独立样本t检验比较WS组与对照组患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复效果 (CAP、SIR评分)；采用Spearman分析WS组和对照组患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复时间与康复效果之间的关联性；采用Mann-Whitney Test分析患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复时间规律。 结果： 1、发现3个新的致病性变异位点：家系1发现先证者SOX10基因 (NM_006941) 存在缺失插入突变 c.328_329delinsTT (p.Ala110Phe)；家系 2 发现先证者 SOX10 基因(NM_006941) 存在错义突变c.344Cgt;T (p.Ala115Val)；家系3发现先证者PAX3基因(NM_181458) 存在移码突变 c.795_811delCTGGTTTAGCAACCGCC (p.Trp266fs)。这3个变异位点在ClinVar和HGMD数据库未收录，也未见文献报道，均为本研究新发现的变异位点。根据ACMG指南，均为致病性变异位点。 2、发现1个新的拷贝数变异：家系4发现先证者PAX3基因 (NM_181458) 存在Exon2-7缺失，突变类型是拷贝数变异，对家系成员进行Q-PCR验证，结果显示该先证者的变异遗传自父亲。根据ACMG指南，该变异为致病性变异。 3、家系5发现先证者SOX10基因 (NM_006941) 存在剪切突变c.429-1G＞A，对家系成员进行Sanger验证，结果显示先证者父母均不携带该变异位点，该先证者为新发突变；家系 6 发现先证者 PAX3 基因 (NM_181458) 存在错义突变 c.142Ggt;C (p.Gly48Arg)，对家系成员进行Sanger验证，结果显示该变异位点遗传自母亲。根据ACMG指南，这2个变异位点均为致病性变异位点。 4、WS组患儿共20例，男性患儿14例，女性患儿6例，其中12例行单侧人工耳蜗植入术，8例行双侧人工耳蜗植入术；对照组患儿共20例，男性患儿14例，女性患儿6例，其中12例行单侧人工耳蜗植入术，8例行双侧人工耳蜗植入术。WS组与对照组患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复效果 (CAP、SIR评分) 均无统计学差异(Pgt;0.05)。WS组和对照组患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复时间与康复效果(CAP、SIR评分) 之间的关联性均有统计学差异 (Plt;0.001)，术后听觉言语康复时间与康复效果 (CAP、SIR 评分) 之间均存在正相关关系 (R=0.943, R=0.887; R=0.822, R=0.755)。按照术后听觉言语康复时间把患儿分为五组，4年~组与4年以内各组的CAP、SIR评分均有统计学差异 (Plt;0.05)，与5年以上组的CAP、SIR评分均无统计学差异(Pgt;0.05)；术后听觉言语康复效果随着康复时间的增加而提高，并于术后康复4年时达到平台期。 结论： 1、全外显子组测序可以从分子遗传学水平上明确诊断WS，本研究6例WS患儿中有3例WS1型的致病基因是PAX3基因，3例WS2型的致病基因是SOX10基因；发现了3个新的致病性变异位点，1个新的拷贝数变异，丰富了WS的基因突变谱。 2、WS组与对照组患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复效果基本相当；WS组患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复时间与康复效果之间呈正相关关系，听觉言语康复效果随着康复时间的延长而提高，并于术后康复4年时达到平台期，为WS患儿人工耳蜗植入术后的听觉言语康复时间提供了依据。
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