摘要
目的： 本研究拟利用网络药理学和分子对接技术探讨莪术醇治疗膀胱癌的作用机制。然后通过体外细胞实验，验证核心靶点结合的可能性，观察莪术醇对膀胱癌细胞T24、5637的增殖、克隆形成、迁移和凋亡能力的影响。 方法： 1.运用网络药理学，通过药物靶点预测数据库SwissTargetPrediction、Pharmmapper和疾病靶点数据库GeneCards、MalaCards、DisGenet等寻找莪术醇和膀胱癌的共同靶点，用STRING数据库构建共同靶点的PPI互作网络，Cytoscape软件构建靶点-BLCA可视化药理网络图。利用AutoDockVina软件对莪术醇作为小配体和共同靶点的蛋白晶体进行分子对接，筛选出核心靶点进一步进行实验分析。 2.体外实验选用膀胱癌T24、5637两株细胞。通过CCK-8实验检测不同剂量莪术醇对膀胱癌细胞的生长抑制作用；平板细胞克隆形成实验检测莪术醇对膀胱癌细胞的克隆形成能力影响；划痕愈合实验检测莪术醇对膀胱癌细胞迁移能力的影响；流式细胞技术（Annexin-V/PI双染）检测莪术醇处理后膀胱癌细胞凋亡情况；WesternBlotting实验检测莪术醇处理后，相关蛋白表达情况。 结果： 1.通过网络药理学分析，得出莪术醇和BLCA共有8个潜在共同作用靶点，分别是CCND1、E2F1、MDM2、EPHB2、ERBB2、MPO、SOD2、TP73。分子对接结果表明莪术醇能与PI3K-AKT信号通路下游分子CCND1(CyclinD1)通过2个氢键与苏氨酸和丙氨酸良好结合，与MDM2的苯丙氨酸和谷氨酸通过2个氢键结合。 2.CCK-8实验、平板细胞克隆形成实验、划痕实验结果发现莪术醇能抑制T24、5637膀胱癌细胞的增殖、集落形成和迁移能力，并呈剂量依赖性。同时，莪术醇能促进T24、5637膀胱癌细胞的凋亡。WesternBlotting实验结果表明，莪术醇处理T24、5637膀胱癌细胞后，能下调MDM2、CCND1蛋白表达水平。同时，PI3K、AKT蛋白表达无变化，磷酸化的PI3K、AKT表达下降，说明Cur说明通过对PI3K/AKT/CyclinD1信号通路的抑制和下调MDM2的表达，从而抑制膀胱癌细胞增殖并促进其凋亡。 结论：莪术醇可能通过抑制PI3K/AKT/CyclinD1信号通路和抑制MDM2靶点等途径，发挥治疗膀胱癌的作用。莪术醇通过多靶点、多途径抑制膀胱癌细胞生长，有望为临床治疗膀胱癌提供新思路和新靶点，为今后开发用于膀胱癌的新药提供理论依据。
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