摘要
梨腐烂病（Valsacanker）是梨树上一种重要的枝干病害，常与轮纹病复合侵染，造成果树大量死亡甚至毁园；目前尚无有效防治措施。近年来，真菌病毒在植物病害生物防治方面具有广阔前景，为梨树腐烂病生物防治提供了新思路。本研究以实验室保存的梨腐烂病和轮纹病菌株为材料，测定梨腐烂病菌与轮纹病菌感染同种病毒的发生频率，系统分析梨腐烂病菌中感染真菌病毒情况及病毒种类，筛选由病毒引起的弱毒菌株，评价其生防效果，为利用弱毒菌株防治果树真菌病害提供良好的生防材料。具体研究结果如下： （1）对53株梨腐烂病菌和6株梨轮纹病菌进行高通量测序，生信分析及RT-PCR鉴定，明确了测序腐烂病菌携带5种+ssRNA病毒，分别为Fusariviridae科的Valsapyrifusarivirus1（VpFV1）、Valsapyrifusarivirus2（VpFV2）、Valsapyrifusarivirus3（VpFV3），Botourmiaviridae科的Valsapyripenoulivirus1（VpPV1），Mitoviridae科的Valsapyrimitovirus1（VpMV1）以及1种暂未分类的dsRNA病毒ValsapyridsRNA1（VpV1）。发现4种病毒（VpFV2、VpFV3、VpMV1和VpV1）均可侵染梨腐烂病菌与轮纹病菌。 （2）测定、筛选获得一株携带VpFV1和VpPV1的弱致病力菌株YN-3。测定VpFV1除poly(A)尾全长6722nt，含有3个ORF，其中ORF1编码多聚蛋白（含RdRp和Helicase保守结构域），ORF2编码未知功能蛋白，ORF3包含SMC保守结构域。VpPV1全长2769nt，含有1个ORF，编码RdRp。进化树及序列同源性分析表明，VpFV1和VpPV1分别是Alphafusarivirus和Penoulivirus的新病毒。 （3）弱毒菌株YN-3携带病毒传染能力分析：获得YN-3携带不同病毒衍生菌株及无毒菌株，明确了VpFV1是引起菌株YN-3生长缓慢及致病力减弱的主要因子。采用菌株水平对峙以及总RNA与原生质体转染的方法，明确了菌株YN-3携带VpFV1能传染至其他种类腐烂病菌及轮纹病菌中，并引起致病力减弱。 （4）YN-3菌株生防潜力评估：通过菌株YN-3与其他腐烂病菌对峙培养以及YN-3发酵液与其他菌株共培养分别接种枝条，证实YN-3菌株可以介导强致病力腐烂病菌株接种引起致病力减弱现象，揭示了YN-3菌株具有生防潜力。 本研究首次摸清了测序梨腐烂病菌感染真菌病毒情况及携带病毒种类，明确了VpFV1是引起菌株YN-3弱致病力的主要因子，具有用于梨树腐烂病和轮纹病防治的潜力，获得了良好的候选生防材料。
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