摘要
【目的】SMAD3蛋白是SMADs蛋白家族的成员之一，已被证实在部分人体实体肿瘤在的发生及进展中发挥抑癌或促癌的作用。而在结直肠癌（Colorectalcancer,CRC）中，有关SMAD3的研究却非常有限，因此本实验拟在体外探究SMAD3在CRC细胞中的表达及生长转移的作用，初步探索其作用的基本机制。 【方法】通过使用慢病毒系统感染人结直肠癌细胞株，我们建立了一个稳定高表达和敲低SMAD3的CRC细胞系。我们通过使用qRT-PCR和WesternBlot来验证这个方法的效率。检测SMAD3对CRC细胞的以下生物学功能的影响：采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)生长实验、划痕实验、Transwell侵袭、迁移实验、细胞克隆形成实验观察SMAD3在CRC细胞中的作用。之后，对SMAD3在CRC侵袭迁移中的潜在作用机制进行探讨，应用WesternBlot检测SMAD3对稳定构建高低表达的CRC细胞株EMT相关蛋白标志物表达改变的影响。 【结果】成功构建了SMAD3稳定高表达的细胞模型（RKO-SMAD3、LoVo-SMAD3及其对照RKO-Control、LoVo-Control），SMAD3稳定敲低的细胞模型（SW0480-shSMAD3、DLD1-shSMAD3其对照SW480-shControl、DLD1-shControl）。经过Westernblot和qRT-PCR实验，我们发现各细胞模型组中对照组SMAD3的表达水平和高/低表达组效率都有显著的差异；经过CCK8、Transwell迁移和侵袭实验以及平板克隆实验的证实，在SMAD3稳定敲低组，细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及克隆形成能力均有显著提升；相比之下，当SMAD3基因高表达时，结果却完全不同。提示SMAD3基因表达与细胞增殖、细胞迁移和侵袭能力、克隆形成能力负相关。经过检测，当SMAD3表达水平降低时，结直肠癌细胞中EMT相关因子E-Cadherin的表达也会相应减少，而Snail、N-Cadherin和Vimentin蛋白的表达则会升高，而当SMAD3表达水平升高时，这种变化则会出现相反的结果，这表明SMAD3可促进结直肠癌细胞的EMT进程。 【结论】SMAD3在结直肠癌中发挥着重要作用，它可以促进癌细胞的生长和转移，并且可以激活癌细胞的EMT过程，从而增强癌细胞的侵袭和迁移能力。
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