摘要
目的：1.运用网络药理学的预测方法，探索柴胡疏肝汤治疗癫痫的核心靶点和信号通路，构建药物有效成分-疾病生物网络，揭示柴胡疏肝汤治疗癫痫的多成分、多靶点、多途径机制。 2.通过观察柴胡疏肝汤对癫痫大鼠癫痫发作频率和持续时间的影响，并利用蛋白质免疫印迹(WesternBlot,WB)和实时定量聚合酶链反应检测系统(TheDetectingSystemofReal-timePolymeraseChainReaction,QRT-PCR)对核心靶点进行初步验证，阐明柴胡疏肝汤对癫痫发作频率和治疗靶点的影响。 方法：1.使用中药系统药理学数据库与分析平台（TraditionalChineseMedicineSystemsPharmacologyDatabaseandAnalysisPlatform,TCMSP）、中医药证候关联数据库（SymptomMapping）、中医药综合数据库（TraditionalChineseMedicineIntegratedDatabase,TCMID）、中医药百科全书数据库（TheEncyclopediaofTraditionalChineseMedicine，ETCM）及文献获取柴胡疏肝汤的活性成分；从PubChem平台获取每个成分的化学结构，再使用SwissADME和SwissTargetPrediction对每个活性成分进行筛选和靶点预测，并从DrugBank、TTD、GeneCards、Pharmgkb和OMIM数据库收集癫痫治疗相关靶点；应用STRING平台构建蛋白互作网络，以Cytoscape3.8.0构建药物-成分-靶点-疾病网络；使用CytoNCA筛选核心基因，运用VarElect分析靶点与疾病之间的关联度。最后，使用R软件进行GO和KEGG富集分析，并使用分子对接进行验证和可视化。 2.对60只雄性SD大鼠随机分为三组（空白组、模型组、柴胡疏肝汤组），采用腹腔注射氯化锂-盐酸匹罗卡品造模，相应灌胃7天后，观察各组大鼠癫痫发作次数及持续时间，并通过qRT-PCR以及WB检测大鼠脑组织中AKT1、TP53、CASP3、VEGFA、IL1B基因及蛋白表达差异，从而形成对网络药理学预测靶标的实验验证。 结果: 1.通过TCMSP、ETCM等数据库获取柴胡疏肝汤的有效活性成分129个，作用靶点239个；从DrugBank、TTD、GeneCards、Pharmgkb以及OMIM数据库获取癫痫治疗相关靶点2623个；在构建药物-成分-靶点-疾病PPI网络中，有199个节点，共形成866条边，并包括82个共同靶点；通过蛋白互作分析，使用VarElect进行相关性分析，最终确定核心基因AKT1、TP53、CASP3、VEGFA、IL1B；通过富集分析，发现柴胡疏肝汤主要在参与炎症反应等生物功能过程参与癫痫的调控，以及可能通过MAPK信号通路、VEGF信号通路、IL-17信号通路等发挥对癫痫的防治作用。 2.在各组大鼠药物干预两周后，模型组癫痫发作次数明显多于空白组（P＜0.05），模型组的平均癫痫持续时间最长，柴胡疏肝汤组次之。 3.在动物实验中发现，在各组大鼠蛋白的表达量中，与模型组相比较，柴胡疏肝汤组中AKT1、CASP3、VEGFA、IL-1B表达量均下降（P＜0.05），而TP53蛋白表达量增加（P＜0.05）。在基因相对表达量中，相对于模型组而言，柴胡疏肝汤组的AKT1、CASP3、VEGFA、IL-1B基因相对表达量均下降（P＜0.05），TP53增加（P＜0.05）。 结论: 1.本研究通过网络药理学靶标预测得出柴胡疏肝汤可以通过对AKT1、TP53、CASP3、VEGFA、IL-1B等靶点的调控，参与炎症反应等生物功能过程参与癫痫的调控，以及可能通过神经细胞中的MAPK信号通路、VEGF信号通路以及IL-17信号通路等发挥对癫痫的防治作用。 2.通过动物实验研究发现，柴胡疏肝汤能够减低大鼠的癫痫发作次数，缩短大鼠的癫痫持续时间。 3.对网络药理学预测靶点基因的验证结果表明，柴胡疏肝汤能够降低癫痫大鼠AKT1、CASP3、VEGFA、IL-1B并增加TP53基因及蛋白的表达，从而可能参与减轻神经炎症反应和改善神经细胞功能来实现癫痫的防治作用，进一步探讨了柴胡疏肝汤防治癫痫的机制研究。
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