摘要
目的：1、通过调查分析2012年1月至2021年12月在克拉玛依市中心医院行宫颈HR-HPV检测及宫颈病变检出的情况，了解这十年宫颈HR-HPV感染及宫颈病变检出的变化，进一步指导本地区宫颈癌的预防工作；2、通过分析HPVE6/E7mRNA检测在HR-HPVDNA阳性病例中对宫颈病变诊断的情况，进一步了解HPVE6/E7mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值；3、通过在不同宫颈病变的脱落细胞标本中筛选并验证对宫颈癌筛查有意义的DNA甲基化标志物，进一步为宫颈癌筛查寻求有意义的DNA甲基化标志物。方法：1、收集2012年1月至2021年12月在克拉玛依市中心医院行宫颈HR-HPV检测女性的相关资料，以病理诊断作为宫颈病变的诊断标准，纵向了解HR-HPV感染及宫颈病变的检出在总体及不同年龄段中的年度变化趋势，并横向了解本地区常见的HR-HPV感染亚型。2、收集在宫颈癌筛查中HR-HPVDNA检测阳性女性的相关资料，以病理诊断作为诊断的“金标准”，了解HPVE6/E7mRNA检测在不同情况下诊断宫颈病变的意义，并比较HPVE6/E7mRNA检测与TCT在诊断宫颈HSIL+中的应用价值。3、收集宫颈癌筛查中HR-HPV阳性的不同病变的宫颈脱落细胞标本，采用Illumina850K甲基化芯片技术对6例LSIL-和9例HSIL+进行DNA甲基化情况分析，筛选出在宫颈HSIL+组与LSIL-组间有明显差异的甲基化基因行焦磷酸测序，进一步验证出在宫颈HSIL+组与LSIL-组间有明显差异的甲基化基因。结果：1、2012年1月～2021年12月在克拉玛依市中心医院行宫颈HR-HPV筛查的女性总数为85429例，其中36~45岁年龄段女性的人数构成比最高，55岁以上年龄段的人数构成比最低；2012~2021年HR-HPV总体感染率依次为16.40%（1376/8391）、20.81%（1479/7106）、25.20%（1472/5842）、19.71%（1950/9895）、13.80%（1263/9153）、13.42%（1010/7528）、12.98%（1021/7864）、12.86%（1044/8119）、11.47%（1153/10048）及11.04%（1268/11483），年度变化呈下降趋势（APC=-7.34%），差异有统计学意义（P＜0.05）；2012~2021年不同年龄段间HR-HPV感染率的差异有明显统计学意义（P＜0.05），其中55岁以上年龄段HR-HPV感染率最高；2014~2021年各年龄段HR-HPV感染率均呈下降趋势，年度变化趋势差异均有统计学意义（P＜0.05）；2012~2021年HR-HPV感染中宫颈HSIL+或LSIL+的检出率总体均呈上升趋势，年度变化趋势差异均有统计学意义（P＜0.05）；但宫颈癌在宫颈LSIL+中的检出比率呈下降趋势（APC=-12.65%，P＜0.05）。25~35岁、36~45岁、46~55岁年龄段的宫颈HSIL+或LSIL+的检出率在2012~2021年总体呈上升趋势，年度变化趋势差异均有统计学意义（P＜0.05），55岁以上年龄段HSIL+或LSIL+总体检出率在各年龄段中均为最高18.66%（95/509）或23.97%（122/509），但HSIL+或LSIL+的年度检出率均无明显上升趋势；本地区常见的前五位的HR-HPV感染亚型依次为：HPV52型（17.28%），HPV16型（13.76%），HPV58型（11.50%），HPV56型（10.75%），HPV51型（10.15%）；宫颈HR-HPV单一感染构成比为80.20%（1316/1641），混合感染构成比为19.80%（325/1641）。2、在宫颈病变的诊断中，HPVE6/E7mRNA检测在HSIL+的阳性率为77.85%（116/149），在LSIL-的阳性率为27.27%（39/143），两者差异有明显统计学意义（P＜0.05）；HPVE6/E7mRNA检测与病理诊断的完全符合率为75.34%（220/292），两者一致性检验的Kappa值为0.506；HPVE6/E7mRNA检测在不同HR-HPV类型及不同年龄段中诊断宫颈HSIL+均无明显统计学差异（P＞0.05）；HPVE6/E7mRNA在不同宫颈病变组织中的阳性表达随宫颈病变程度的加重而呈上升趋势（χ2=75.749，P＜0.05）；而且HPVE6/E7mRNA的阳性表达与病变程度的加重成中度正相关（r=0.517，P＜0.05）；HPVE6/E7mRNA检测诊断HSIL+的敏感度为77.9%，TCT诊断HSIL+的敏感度为73.2%，两者相比无明显统计学差异（P＞0.05）；HPVE6/E7mRNA诊断HSIL+的特异度为72.7%，TCT诊断HSIL+的特异度为53.1%，两者相比有明显统计学差异（P＜0.05）；HPVE6/E7mRNA诊断HSIL+的约登指数为0.506，高于TCT（0.263）；计算诊断HSIL+的ROC曲线下的面积（AUC），HPVE6/E7mRNA为0.753，TCT为0.632，“HPVE6/E7mRNA和TCT”为0.705，“HPVE6/E7mRNA或TCT”为0.680；HPVE6/E7mRNA检测与TCT诊断HSIL+及LSIL-的一致性较差；HPVE6/E7mRNA表达对HSIL+的宫颈锥切后病理变化无预测作用；HPVE6/E7mRNA检测在宫颈组织与宫颈脱落细胞标本中诊断宫颈病变无明显统计学差异（χ2=3.413，P＞0.05）。3、对DNA提取质检合格的不同宫颈病变的标本进行DNA甲基化分析，共筛选出751个DMP位点，这些位点较均匀的分布在各个染色体上，相较于LSIL-组，HSIL+组有641个高甲基化位点，105个低甲基化位点。从中筛选出两个有明显差异的甲基化基因GSTM5和PRR23C，其对应的位点为cg25210835、cg24467349和cg24530147、cg06508738、cg02930239，经焦磷酸测序预实验筛选出PRR23C的两个位点cg24530147和cg06508738，并对这两个位点及另外检测出的5个位点进行扩大样本实验，结果表明该区域的平均甲基化率在HSIL+组明显高于LSIL-组（P＜0.05），其中cg24530147位点和另外的2个CpG位点在HSIL+组的甲基化率明显高于LSIL-组（P＜0.05）。结论：1、2012~2021年HR-HPV感染率总体呈下降趋势，宫颈HSIL+或LSIL+检出率总体均呈上升趋势，然而宫颈癌在宫颈LSIL+中的检出比率呈下降趋势；55岁以上女性年度筛查人数构成比最小，但其HR-HPV感染率、HSIL+或LSIL+检出率均为各年龄段中的最高；本地区常见的HR-HPV亚型依次为：HPV52、HPV16、HPV58、HPV56和HPV51。2、HPVE6/E7mRNA检测在HSIL+中的阳性率明显高于在LSIL-中的阳性率，HPVE6/E7mRNA的阳性表达随宫颈病变程度的加重而呈上升趋势；HPVE6/E7mRNA检测诊断HSIL+的能力明显优于TCT，在宫颈癌筛查中具有较好的应用价值。3、本实验发现了一个在宫颈癌筛查中新的DNA甲基化基因PRR23C，其中有三个位点在HSIL+组的甲基化率明显高于LSIL-组，在宫颈癌筛查中有一定的应用前景。
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