摘要
新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)是单股、负链RNA病毒，可感染250余种鸟类，对全球养禽业具有巨大威胁。F蛋白是NDV的主要毒力因子，定位于NDV囊膜上，介导病毒进入细胞并引起宿主细胞的膜融合。F蛋白胞质尾区(Cytoplasmictail,CT)存在两个保守的转运基序:酪氨酸(YLMY)和双亮氨酸(LL)基序，其中YLMY基序已经证明可以调控NDV致病性。本研究聚焦于F蛋白CT区LL基序在NDV生命周期中的作用，从病毒出芽的角度分析了LL基序影响病毒生物学特性的原因。 本研究首先构建了LL基序突变的F蛋白的真核表达载体，证明了LL基序突变会抑制F蛋白的表达和细胞融合功能。进一步构建LL基序突变的NDV感染性克隆,成功拯救出537位亮氨酸突变为丙氨酸的重组毒株rSG10*-F/L537A，并对比了重组毒株和亲本毒株rSG10*在毒力、致病性、复制水平、F蛋白合成、细胞融合能力等方面的差异。结果显示，LL基序的突变会导致NDV对3周龄SPF鸡的致病性减弱,与rSG10*组相比，rSG10*-F/L537A组感染鸡临床症状轻微、死亡率由80％下降至20％;同时LL基序突变会抑制NDV的复制水平、蛋白表达、合胞体形成等生物学特性。 进一步从重组毒株出芽能力减弱入手，围绕rSG10*-F/L537A基因组复制、转录和翻译能力以及F蛋白在膜表面表达丰度、子代病毒粒子组装等环节分析LL基序调控NDV出芽能力的原因。结果显示，LL基序突变不会影响NDV基因组的复制、转录或翻译以及子代病毒的组装，但会影响细胞膜表面F蛋白的表达量，与亲本毒株rSG10*相比，rSG10*-F/L537A感染细胞的膜表面F蛋白丰度降低了约50％。 本研究证明了LL基序突变降低F蛋白在细胞膜表面的丰度导致NDV出芽能力降低，进而减弱了NDV的细胞增殖水平和致病性，这为进一步理解CT区对于F蛋白功能和NDV致病性的重要性提供了理论基础。
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