摘要
2011年左右，由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus,PRV）变异株引起的伪狂犬病重创养猪业，经典疫苗株不能提供有效临床保护，给我国养猪业可持续发展带来严峻挑战。以PRV变异毒株HB1201为模式病原，实验室前期发现病毒囊膜糖蛋白gC和gD变异是变异株突破经典疫苗株免疫保护的重要机制，并利用CRISPR编辑技术构建了以经典疫苗株Bartha-K61为骨架，嵌合变异株HB1201保护性抗原基因（gB、gC和gD）的重组病毒Bartha-gBCDHB1201。本研究旨在初步评价三基因嵌合灭活疫苗对仔猪的免疫保护效力，并测定PRV变异株HB1201的半数感染致死量，建立良好的动物攻毒感染模型。 1.嵌合灭活疫苗的保护效力评价:将嵌合毒灭活后，配合佐剂，以肌肉注射途径免疫接种1月龄仔猪，间隔14天后加强免疫，加强免疫21天后经滴鼻途径接种1×107TCID50的变异毒株HB1201和经典毒株Fa,通过仔猪的临床症状、存活率、组织病理损伤，以及组织中病毒载量，分析疫苗免疫保护效力。试验结果表明，灭活疫苗对仔猪有较好的安全性，免疫7天后即可检测到gB抗体，对变异毒株HB1201的致死性攻击具有较好的保护效果，能够显著减轻HB1201感染仔猪的临床症状，对仔猪的脏器能产生有效的保护，显著降低PRV对组织的损伤及组织中的病毒载量。此外，灭活疫苗对Fa毒株的感染也有良好保护。 2.HB1201攻毒动物模型的建立:为模拟疫苗免疫后的攻毒场景，以2月龄仔猪为攻毒模型，以不同剂量（104、105、106和107TCID50）PRV变异株HB1201滴鼻接种，观察仔猪临床症状，评价组织病理变化，测定组织中病毒载量。结果显示，建立的仔猪攻毒感染模型的感染途径、临床症状表现、病理变化和组织损伤与报道的猪伪狂犬病一致，攻毒剂量与仔猪的临床症状和组织病理损伤呈正相关，且各组仔猪具有较好的重复性。HB1201毒株感染2月龄仔猪的半数致死量（LD50）为106TCID50,而107TCID50剂量为致死性高剂量，感染猪只在7天内全部死亡。 综上，本研究初步评价了PRV嵌合灭活疫苗的免疫效力，发现其能够对高致死性剂量的PRV变异株攻击提供有效保护，并建立了PRV变异株HB1201感染2月龄仔猪的攻毒感染模型，明确了其LD50,为后续深入评价该疫苗的免疫效力提供了物质和技术支撑。
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