摘要
淀粉由直链淀粉和支链淀粉构成，两种组分的比例决定着淀粉的糊化特性、溶解度、凝胶特性等性能，因此直支比是影响淀粉产品品质的重要参数。分子转子是一类荧光发色剂，其荧光响应取决于周围微环境的自由体积。基于此，本研究设计了一种利用分子转子CCVJ和DCVJ的荧光响应来反应支链淀粉含量的淀粉直支比检测方法，对其荧光响应条件进行筛选，评价检测方法的效果，对发光机理进行了初步探究，并开发出一款用于测定豆类中支链淀粉含量的分析试剂盒。主要结果如下: (1)CCVJ和DCVJ检测体系的最佳激发波长分别为430和460nm，最佳探针浓度分别为0.019和0.032mM、最适缓冲液浓度分别为5和10mM、最适pH分别为7和4，最佳检测温度25℃。在避光条件下，分子转子CCVJ和DCVJ分别在100min内和60min内可以保持荧光发射光子数稳定。在1h持续的光照下，CCVJ比DCVJ保持更高更稳的荧光信号。高浓度离子环境会降低DCVJ体系的荧光发射光子数，但对CCVJ体系无影响。直链淀粉不会改变CCVJ和DCVJ的荧光响应。 (2)CCVJ在0～1.4wt％的线性范围内与支链淀粉含量呈良好的线性关系，方法检出限和定量限分别为0.013wt％和0.043wt％,加标回收率在103.6～116.9％之间，相对标准偏差在0.7～2.0％之间。DCVJ在0～0.8wt％的线性范围内与支链淀粉含量呈良好的线性关系，方法检出限和定量限分别为0.022wt％和0.073wt％，加标回收率在92.1～104.2％之间，相对标准偏差在1.2～2.8％之间。两种分子转子对普通玉米淀粉、豌豆淀粉和绿豆淀粉的检测效果较好。除Fe2+、Fe3+和H3PO4外，其余常见干扰物质对CCVJ和DCVJ最大荧光发射光子数的影响不大。0～1％支链淀粉溶液中影响分子转子荧光发射的主要因素为支链淀粉分子内部结构形成的空间限制。 (3)利用分子转子检测支链淀粉含量的方法，考察了CCVJ在豆类样品中的检测能力。结果显示，以CCVJ为荧光探针的方法适用于淀粉晶形结构为C型的豆类中支链淀粉含量的检测，检测结果与伴刀豆球蛋白法接近，结果的标准偏差在±3.0％之间，与其他传统检测方法相比分子转子法具有成本低、时间短的优点，以此为基础设计的试剂盒有望成为淀粉直支比快检的新方法。
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