摘要
目的：通过观察系统性硬皮病（SSc）小鼠经刺山柑总生物碱治疗后，其对SSc密切相关的Morphogen通路中Notch与Wnt信号通路相关基因或蛋白的表达的影响，探讨刺山柑总生物碱治疗SSc的具体机制。方法：1.BALB/c雌性小鼠90只随机分为6组：空白组、SSc模型组、刺山柑总生物碱低、中、高剂量组、阳性药青霉胺组。除空白组，其他组连续28d皮下注射博来霉素建立SSc小鼠模型，空白组注射生理盐水，造模后连续56d各受试药组将低、中、高剂量受试药物按一定剂量涂抹于小鼠背部，阳性组用青霉胺灌胃；2.末次给药后4h处死小鼠，取小鼠皮肤，Masson染色观察各组小鼠皮肤组织胶原蛋白表达的影响；3.免疫组化检测各组小鼠皮肤Wnt1、Wnt3a、Hes1、Notch2蛋白表达；4.Westernblotting检测各组小鼠皮肤Notch1、Notch2、Jagged1、NICD、MAML1、Hes1、β-catenin、Wnt3a蛋白表达；5.qRTPCR检测各组小鼠皮肤Hes1、HeyL、Wnt2、Wnt3amRNA表达。结果：1.Masson染色结果显示：与空白组相比，SSc模型组的小鼠胶原蛋白沉积显著增加；与SSc模型组相比，中、高剂量给药组和阳性药青霉胺组胶原蛋白沉积明显减少。2.免疫组化结果显示：与空白组相比，SSc模型组的Hes1、Notch2、Wnt1、Wnt3a蛋白表达显著上调（Plt;0.01）；相较于模型组，各剂量刺山柑总生物碱组及青霉胺组Wnt1、Wnt3a、Hes1、Notch2蛋白表达明显下调（Plt;0.01）。3.Westernblotting结果显示：与空白组相比，模型组Notch1、Notch2、Jagged1、NICD、MAML1、Hes1、β-catenin、Wnt3a蛋白表达明显上调（P＜0.05，Plt;0.01）；相较于模型组，各剂量给药组及青霉胺组Notch1、Notch2、Hes1蛋白表达显著下调（P＜0.05，P＜0.01），低、中剂量给药组及青霉胺组NICD蛋白表达明显下调（P＜0.01），中、高剂量给药组及青霉胺组β-catenin、Wnt3a、Jagged1蛋白表达明显下调（P＜0.01），低剂量给药组的MAML1蛋白表达明显下调（P＜0.01）。4.qRTPCR结果显示：与空白组相比，模型组Hes1、HeyL、Wnt2、Wnt3amRNA表达明显上调（Plt;0.01）；与模型组相比，各剂量给药组及青霉胺组Wnt2、Wnt3amRNA表达明显下调（P＜0.01），中、高剂量给药组及青霉胺组Hes1mRNA表达明显下调（P＜0.05，P＜0.01），中剂量给药组HeyLmRNA表达明显下调（P＜0.05）。结论：刺山柑总生物碱可以减少SSc皮肤胶原沉积，下调异常表达的Notch1、Notch2、NICD、Jagged1、MAML1、Hes1、HeyL、Wnt1、Wnt2、Wnt3a、β-catenin等基因或蛋白的表达，提示刺山柑总生物碱可以在一定程度上改善系统性硬皮病皮肤纤维化现象，其作用机制可能是与抑制Morphogen通路中的Notch和Wnt信号通路相关，本研究为今后更深一步研究刺山柑总生物碱治疗SSc的作用机理提供了参考。
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