摘要
紫珠叶为马鞭草科紫珠属植物杜虹花Callicarpa formosana Rolfe的干燥叶。2020版《中国药典》记载紫珠叶具有“凉血收敛止血，散瘀解毒消肿”的功效，临床常用于治疗呕血、咳血、便血等出血症状。 现代植物化学研究表明紫珠叶中含有丰富的苯丙素、黄酮以及萜类化合物，这些化合物被认为是紫珠叶发挥药理活性的主要小分子活性成分。近年来，紫珠属植物化学成分研究发现，该属植物中富含多糖以及单糖、寡糖类成分。已有研究表明糖类化合物，特别是多糖组分具有抗炎、抗肿瘤、降血糖和免疫调节等作用，是中药的传统药效部位。因此，对中药的糖类组分建立质控方法进行质量评价是中药质量评价中不可或缺的关键组成部分，关乎中药质控体系的完整性。口服汤剂以及粉末外敷是紫珠叶临床常用给药方式，水溶性糖类组分是其重要部分。但紫珠叶中糖类成分的相关质量研究尚未见报道。现行药典中紫珠叶的质控指标为单成分—毛蕊花糖苷，难以从多成分角度评价紫珠叶质量。由此可见，优化现行紫珠叶小分子质量评价方法，整合糖类组分质量评价体系，对紫珠叶进行整体质量评价，将对提升紫珠叶质量标准、保证其临床疗效有重要意义。为此，本课题开展了以下四个方面的研究:对采集的紫珠叶药材进行生药学鉴定，归纳总结紫珠叶性状特征、显微特征、横切面特征、粉末特征、（超）显微特征，为准确鉴定紫珠叶补充了科学依据;基于超高效液相色谱联合四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）技术及质谱多反应监测（MRM）模式，建立紫珠叶小分子组分定性定量分析方法，对自采紫珠叶和商品药材中的3个小分子成分进行定量分析、14个具有相同母核的小分子成分进行半定量分析,并运用多变量数据分析方法从小分子组分角度评价商品紫珠叶的质量一致性;采用糖组学策略（HPLC-PAD、HPGPC-ELSD及UV-VIS）系统评价了自采紫珠叶和商品药材中多糖、寡糖、单糖的组成和含量，运用多变量数据分析方法从糖类组分角度评价了商品紫珠叶的一致性。具体如下: 一、紫珠叶文献综述 系统归纳总结了紫珠叶的生药学鉴定、化学成分以及质控方法研究进展，为后续紫珠叶的质量研究奠定基础。并在此基础上，提出了本课题的总体研究思路。 二、紫珠叶生药学鉴定 我国药典中虽有紫珠叶的性状鉴别和粉末鉴别，但紫珠属药材性状和粉末特征近似，难以准确区分。本章对紫珠叶的横切面特征、显微定量常数和超显微特征进行研究，整合原植物性状特征、粉末鉴别对紫珠叶进行系统的生药学鉴定特征总结。通过对紫珠叶原植物外观性状特征、叶片显微特征以及显微定量常数测定、粉末特征、超显微结构特征进行系统归纳总结，发现其气孔为类圆形，气孔轴式为无规则型，并测定其脉岛数为13.75～14.07，栅栏比为2.24～2.52,为鉴定紫珠叶补充了科学依据。 三、紫珠叶小分子组分定性定量研究及商品一致性评价 采用UPLC-QTOF-MS/MS技术对紫珠叶小分子组分进行全成分表征，共鉴定出32个代表性成分，其中，苯丙素类化合物6个，黄酮类化合物7个，萜类化合物19个。并对代表性小分子化合物的裂解规律进行归纳总结。 优化UPLC-QTOF-MS/MS分析条件，采用MRM全扫描模式对紫珠叶小分子化合物进行定量分析。对毛蕊花糖苷、木犀草素和熊果酸进行绝对定量分析，对有共同母核的苯丙素、黄酮以及萜类化合物等14个成分进行半定量分析，并评价了自采药材和商品药材的质量一致性。结果显示，商品紫珠叶中的木犀草素含量远远高于自采样品，熊果酸含量则低于自采样品，而毛蕊花糖苷的含量在商品和自采紫珠叶中较为稳定;不同批次样品的萜类化合物含量差异较大，其中，商品中的萜类含量整体低于自采样品。 采用多元统计学分析，对市售12批和自采3批紫珠叶小分子进行质量一致性分析评价，可视化不同来源的紫珠叶化学成分相似性和差异性。结果表明，紫珠叶质量一致性较差，且地域因素与紫珠叶小分子成分之间没有明显联系。 四、基于糖组学策略的紫珠叶糖类组分定性定量研究及商品一致性评价 采用糖组学策略对紫珠叶多糖总含量、单糖组成及含量、相对分子量分布范围、游离单糖和寡糖进行表征，对自采紫珠叶和商品药材进行质量评价。同时，采用多变量统计学对市售12批和自采3批紫珠叶的糖组质量一致性进行分析。结果显示，商品和自采紫珠叶具有同样的单糖组成，但是各单糖含量存在差距;不同批次的紫珠叶具有不同的总糖含量和相对分子量分布范围;所有批次紫珠叶均含有游离果糖和葡萄糖，大部分也都含有蔗糖。
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