摘要
胆汁淤积性肝病(Cholestatic liver disease,CID)是临床常见肝脏疾病，目前治疗药物不足。茵陈术附汤(Yinchenzhufu Decoction,YCZFD)始载于清朝程国彭所著《医学心悟》，主治阴黄证。临床研究表明茵陈术附汤或其加减方对慢性黄疸型肝炎、阴黄证、原发性硬化性胆管炎等疗效显著。课题组前期运用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的急性胆汁淤积小鼠模型以及1，4-二氢-3,5-吡啶二甲酸二乙酯(DDC)诱导的慢性胆汁淤积小鼠模型，发现茵陈术附汤具有显著的抗胆汁淤积肝损伤作用。由于ANIT和DCC模型皆属于化学毒物引起的肝损伤，茵陈术附汤对由体内有毒性胆汁酸石胆酸诱导的胆汁淤积性肝损伤的影响尚不清楚。 目的:采用石胆酸(Lithocholic acid,LCA)诱导的胆汁淤积小鼠模型，考察茵陈术附汤对胆汁淤积性肝损伤的作用，通过网络药理学及分子生物学探索YCZFD抗胆汁淤积性肝损伤的作用机制，为茵陈术附汤的应用与研发提供基础。 方法:(1)采用石胆酸(LCA)诱导的急性胆汁淤积性肝损伤的小鼠模型，考察YCZFD3、6和12g生药/kg给药2周后对胆汁淤积性肝损伤小鼠肝功能指标以及肝脏组织形态学的影响，研究YCZFD对LCA诱导的胆汁淤积性肝损伤的作用;(2)采用网络药理学方法，获得YCZFD治疗胆汁淤积性肝损伤的核心成分及靶点，通过GO和KEGG富集分析，获得关键通路，最后通过分子对接进行初步验证茵陈术附汤潜在作用靶点;(3)采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)胆汁酸测定分析方法，考察YCZFD干预对胆汁淤积小鼠肝脏胆汁酸谱的影响;(4)采用实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)及Western Blot方法，考察YCZFD对胆汁淤积小鼠肝脏胆汁酸代谢酶、转运体及核受体表达和肝脏炎症和细胞焦亡的影响，分析茵陈术附汤肝保护作用的可能分子机制。 结果:(1)茵陈术附汤干预2周后可降低模型小鼠血清ALT、AST、TBA、DBIL和TBIL水平，减轻LCA引起的小鼠肝脏汇管区炎症细胞浸润和肝细胞坏死;（2）网络药理学结果显示，茵陈术附汤治疗胆汁淤积性肝损伤的潜在核心靶点包括胆汁酸调控因子SRC及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6等，分子对接结果显示活性成分与核心靶点有潜在的结合能力，KEGG分析显示茵陈术附汤抗胆汁淤积性肝损伤与其调控NF-κB炎症通路和胆汁分泌等有关;（3）肝脏胆汁酸含量测定结果显示，茵陈术附汤干预后可显著降低胆汁淤积小鼠肝脏牛磺酸结合型胆汁酸、游离胆汁酸和总胆汁酸水平;（4）YCZFD干预可上调胆汁淤积小鼠肝组织胆汁酸代谢酶（Ugt1a1）和转运体（Bsep、Mrp2、Mrp3等）的表达及核受体FXR的表达;YCZFD还可以抑制炎性小体NLRP3活化介导的细胞焦亡及炎症反应，改善胆汁淤积性肝损伤。 结论:茵陈术附汤具有抗石胆酸诱导的胆汁淤积性肝损伤作用，该作用与其激活受体核受体FXR,上调胆汁酸代谢酶和外排转运体的表达、改善胆汁酸稳态以及抑制炎性小体NLRP3活化介导的细胞焦亡和炎症反应有关。
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