摘要
目的:通过对六味养血合剂及生血宝合剂进行临床对照观察，研究六味养血合剂治疗血虚证月经过少的临床疗效及其安全性，并尝试运用网络药理学技术探讨其分子作用机制，为月经过少的诊治提供新的临床方案和理论依据，并为中药新药研发提供临床依据及理论基础。 方法:1.临床研究:收集符合纳入标准的患者64例，采用随机对照法将其分配为观察组32例、对照组32例。六味养血合剂治疗组为观察组，生血宝合剂治疗组为对照组。利用SPSS26.0软件对两组的临床总有效率、PBAC分数及子宫内膜厚度、中医证候积分及血清FSH、LH、E2水平进行分析。2.网络药理学研究:在Genecards、OMIM、PharmGkb及DrugBank数据库中得到月经过少相关靶点基因，在TCMSP数据库中根据生物利用度(OB)及类药性(DL)筛选出六味养血合剂中每味中药的活性成分及相关靶点基因，将两者的靶点基因进行Venn剖析，以此得到两者的交集靶点基因。DAVID在线辅助工具常用对交集基因进行GO功能性分析和KEGG信号通路的分析。STRING数据库平台用作构建交集靶点基因组成的PPI网络图，Cytoscape工具软件则完成对核心基因的分析筛选，并涉及中药复方网络的形成。再选取关键治疗靶点及相关活性组分进行分子结合精准对接验证。通过筛选六味养血合剂的活性药物成分，预测其作用于月经过少的潜在靶标及相关信号通路，初步探讨其治疗月经过少的分子作用机制。 结果:1.临床研究:(1)两组治疗后PBAC总分以及子宫内膜厚度在一定程度上增加，观察组大于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。(2)治疗后两组中医证候积分均有下降，观察组下降程度大于对照组(P＜0.05)。(3)治疗后两组患者FSH水平均明显下降，E2水平明显上升(P＜0.05)。两组FSH水平的降低程度相当(P＞0.05)，观察组E2水平的升高程度优于对照组(P＜0.05)。两组治疗前后LH水平无明显变化。(4)治疗后观察组与对照组的有效率分别为86.67％和76.67％，观察组略优于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。2.网络药理学研究:六味养血合剂中共包含62个活性成分;药物与疾病的共同靶点基因共145个，根据PPI网络及中药复方网络图，核心靶点主要有STAT3、TP53以及AKT1、CYP1A1、ESR1及MAPK1等。GO功能性研究表明，对药物的反应、基因表达的调控、凋亡过程的调控、对雌二醇的反应以及对RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的调控等生物学过程均发挥着重要作用。KEGG通路富集分析结果主要包括PI3K-Akt信号途径、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、血脂以及流体剪切应力与动脉粥样硬化、IL-17信号途径和内分泌水平的抵抗、TNF信号通路等。通过分子对接技术更加深入地证明了关键分子靶点与相关活性成分之间紧密结合且稳定性佳。 结论:1.临床研究:六味养血合剂治疗血虚证月经过少，在改善患者经量、子宫内膜厚度及中医证候评分、雌二醇水平方面有一定优势，在改善FSH水平方面与对照组疗效相当，在临床总有效率中，观察组略高于对照组(P＜0.05)，并且各组患者均无副反应发生，表明六味养血合剂治疗血虚证月经过少临床疗效确切，且安全性佳。2.网络药理学研究:槲皮素、芒柄花黄素、山奈酚、β-谷甾醇以及异鼠李素、木犀草素和儿茶素、黄芪甲苷、芍药苷、川芎嗪等可能是六味养血合剂治疗月经过少的主要活性成分，可能通过调节STAT3、TP53、AKT1、CYP1A1、ESR1、MAPK1等关键靶点，重点调控PI3K-Akt信号途径、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、血脂以及流体剪切应力与动脉粥样硬化、IL-17信号途径和内分泌水平的抵抗、TNF信号通路等发挥作用。
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