摘要
目的: 研究CCNB1沉默对肝癌细胞细胞因子分泌，ROS、NLRP3炎症小体水平变化及对肝癌细胞自噬的影响。 方法: 培养人正常肝细胞系(L02)和肝癌细胞系(QGY-7703,Huh-7,SMMC-7721),以用于后续实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测 CCNB1 在 L02,QGY-7703,Huh-7,SMMC-7721 中的表达情况。将CCNB1表达相对较高的SMMC-7721分为CCNB1特异性干扰RNA组(si-CCNB1)、阴性对照组(si-NC)、空白组(Blank)。 RT-qPCR 和 Western blot 检测 CCNB1 在 si-CCNB1、si-NC、Blank 中的表达情况。用ELISA试剂盒分别检测si-CCNB1、si-NC、Blank中细胞上清炎性因子(IL-1β,IL-18,TNF-α)水平;Western blot 分别检测 si-CCNB1、si-NC、Blank中NLRP3,Caspase1和NF-κB的表达水平;流式细胞术检测si-CCNB1、si-NC、Blank细胞上清中的ROS水平。 Western blot 检测 si-CCNB1、si-NC、Blank 细胞中自噬相关蛋白(LC3BⅡ、LC3BⅠ、Baclin1、p62)和 mTOR、p-mTOR 蛋白的表达水平。 结果: 与L02相比，CCNB1在肝癌细胞系(QGY-7703,Huh-7和SMMC-7721)中高表达，在SMMC-7721中的表达水平最高(P值均＜0.001)。经过敲低处理CCNB1后，与si-NC相比，si-CCNB1中CCNB1表达水平明显降低(P＜0.001),成功构建CCNB1低表达的SMMC-7721细胞株。 与si-NC相比，si-CCNB1中细胞上清炎症因子(IL-1β,IL-18和TNF-α)水平明显降低（P值均＜0.001）。与si-NC相比，si-CCNB1 中NLRP3,Caspase1和NF-κB蛋白的表达水平下调（P值均＜0.001）:与si-NC相比，si-CCNB1上清中ROS水平减低（P值均＜0.001）。 与si-NC相比，si-CCNB1中Baclin1蛋白水平升高，LC3BⅡ/Ⅰ比值升高，p62蛋白水平下调，mTOR磷酸化水平降低。 结论: CCNB1在肝癌细胞中高表达，沉默CCNB1后，可抑制肝癌细胞炎症反应，并诱导肝癌细胞自噬。
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